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    細胞生長曲線測定的原理和方法
    細胞生長曲線測定的原理和方法
    更新時間:2025-02-05
    訪問量: 3043
    廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家

    提供商: 上海研謹(jǐn)生物
    服務(wù)名稱: 細胞生長曲線測定的原理和方法
    規(guī)格: 細胞生長曲線的測定
    價格: 300元
    收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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    細胞生長曲線測定的原理和方法產(chǎn)品概述:

    細胞生長曲線的測定實驗?zāi)康?/span>

    掌握繪制細胞生長曲線的原理和方法。

    細胞生長曲線的測定背景與原理

    生長曲線是測定細胞生長數(shù)的常用方法,也是判定細胞活力的重要指標(biāo),是培養(yǎng)細胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)之一。--般細胞傳代之后,經(jīng)過短暫的懸浮后貼壁,隨后渡過長短不同的潛伏期,即進入快速生長的指數(shù)生長期。在細胞達到飽和密度后,停止生長,進入平臺期,然后退化衰亡。為了準(zhǔn)確描述整個過程中細胞數(shù)目的動態(tài)變化,需連續(xù)對細胞進行計數(shù)。通常計數(shù)6天。為準(zhǔn)que起見,一般每次實驗設(shè)3個平行重復(fù)。

    [材料、試劑與儀器]

    1、實驗材料:

    Hela細胞系。

    2、實驗試劑:

    DMEM培養(yǎng)基(青霉素,鏈霉素,10%血清) ,0.25%胰蛋白酶溶液, 臺酚藍染液。

    3、實驗儀器:

    超凈工作臺,CO2培養(yǎng)箱,倒置顯微鏡,微量移液器,血細胞計數(shù)板,培養(yǎng)瓶,離心管,移液管,廢液缸,蓋玻片, 24孔板。

    [方法與步驟]

    1、取生長良好的細胞,用培養(yǎng)基制成細胞懸液后計數(shù)。根據(jù)細胞計數(shù)結(jié)果按5x104/mL作傳代培養(yǎng)接種于24孔板中,共接種21孔細胞。1 m/孔。余下三孔可設(shè)傳代培養(yǎng)的對照。

    2、24h后每天記錄細胞數(shù)目,每次取3孔細胞,分別進行計數(shù)。計算平均值。連續(xù)計數(shù)7d。細胞用胰酶消化后加入一定量的培養(yǎng)基,混勻制成細胞懸液。取少量懸液與臺酚藍1:1混臺。取一干凈的血細胞計數(shù)板,蓋上蓋片,從蓋片兩邊滴入細胞懸液使之充滿計數(shù)板和蓋片之間。注意滴液勿有氣泡,也不能太多,否則會使蓋片浮起而使細胞計數(shù)不準(zhǔn)。

    3、低倍鏡下觀察,活細胞不著色,臺盼藍著色的細胞呈深藍色,是不健康或已死亡的細胞,不能計數(shù)。

    找出計數(shù)板上的方格,計算四角大格內(nèi)總細胞數(shù),大格線者只計左側(cè)和上方,不計右側(cè)和下方細胞懸液中細胞

    密度計算公式為:細胞數(shù)/mL= (四角大格內(nèi)細胞數(shù)/4) x104x2

    4、根據(jù)細胞計數(shù)結(jié)果,以單位細胞數(shù)(細胞數(shù)/mL)為縱坐標(biāo),以時間為橫坐標(biāo)繪制生長曲線。

     

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    (Label-free)

     

    DIGE技術(shù)實驗服務(wù)

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