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    人胰島細胞分離液試劑盒
    人胰島細胞分離液試劑盒
    更新時間:2025-02-17
    訪問量: 1085
    廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家

    本品用于分離人胰島細胞
    Store at: RT° C Size :2X100ml/kit試劑盒內(nèi)容
    試劑:全血及組織稀釋液 100ml
    試劑:細胞洗滌液 100ml
    試劑B: 100ml
    試劑D: 100ml
    說明書 1份

    人胰島細胞分離液試劑盒產(chǎn)品概述:

    操作說明 細胞分離液試劑盒操作說明::::

    Store at:::RT 試劑盒規(guī)格::::2×100ml/Kit

    人胰島細胞分離液試劑盒試劑盒內(nèi)容:

    全血及組織稀釋液 100ml

    細胞洗滌液 100ml

    試劑 B 100ml

    試劑 D 100ml

    說明書 1

    一、、、、分離方法說明及圖例

    A. 10ml 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 B、D 兩種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);

    B.取 1ml新鮮抗凝血與全血及組織稀釋液(Cat#2010C111911混合并小心加于D液之液面上;或取組織勻漿單細胞懸液(細胞濃度為2×108-1×109/ml,具體制備方法參照

    “二、組織單細胞懸液的制備”)小心加于D液之液面上;

    C. 400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子);

    此時離心管中由上至下細胞分為五層。*層;為血漿層或組織勻漿液層。第二層;為

    富含胰島細胞的 D 液層。。。。第三層;為單個核細胞層。第四層;為透明 B 液層。第五層;為紅細胞層。收集第二層富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 D 液層放入含 4-5ml 細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 轉(zhuǎn)/分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復(fù)洗滌 2 次即得所需胰島細胞。

    注::::A. 提取率約為 80%

    注::::A.. .. 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,,,,酶消化法由于各實驗室選取的消化 酶消化法由于各實驗室選取的消化酶種類各不相同, 酶種類各不相同,,,請各實驗室自行選擇進行試驗 請各實驗室自行選擇進行試驗 請各實驗室自行選擇進行試驗。。。。全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境。。。。 剪碎法::::將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)

    (另購)過濾到試管內(nèi);離心沉淀 1500轉(zhuǎn)/分×3 min,再用細胞洗滌液清洗 3次,每次以 500rpm短時低速離心除去細胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾去細胞團塊。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(25)×107/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109/ml 的單細胞懸液備用。

    勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內(nèi),加入 2ml 組織勻漿液及 20% 勻漿器法胎牛血清;緩慢轉(zhuǎn)動研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集細胞懸液,經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細胞洗滌液洗 3 次,離心沉淀。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(25)×107/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109 /ml 的單細胞懸液備用。 細胞計數(shù)方法: 細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法。一般利用計數(shù)板(血球計數(shù)板)進行。既可用于分離(散)細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,也可用于

    對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù)。不論計數(shù)的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。

    1)、在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。

    2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,至

    蓋玻片被液體充滿為止。

    3)、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,

    對于細胞團按單個細胞計數(shù)。

    4)、按下式計數(shù)細胞懸液的密度:

    細胞密度=(4 個大格細胞總數(shù)/4)×104/ml×稀釋倍數(shù)

    公式中乘以 104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為:

    1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3

      1ml1000mm3

    細胞計數(shù)要點::::

    A 進行細胞計數(shù)時,要求懸液中細胞數(shù)目不低于 104/ml,如果細胞數(shù)目很少要進行離

    心再懸浮于少量培養(yǎng)液中;顯微鏡下計數(shù)時,遇到 2 個以上細胞組成的細胞團,應(yīng)按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數(shù)<200 /10mm2>500 /10 mm2 時,說明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。

    B 要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數(shù)準確性。

    C 取樣前充分混勻細胞懸液,尤其多次取樣更要注意每次取樣都要混勻,以求計數(shù)準確;

    D 數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照一個細胞計算。如果細

    胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計左線,不計右線。

    E 操作時,注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數(shù)。

    初學者易犯的錯誤: 初學者易犯的錯誤:::

    A 計數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。

    B 滴入細胞懸液時蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。

    C 滴入懸液時的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。

    三、、、、注意事項

    A 本分離液是敏光型的,運輸和貯藏過程中在 18-25避光保存,啟封后 4保存本品只能用于科學研究,不能用于臨床檢測

    避免微生物污染。本品為真空包裝,未啟封前于 10 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

    B 待分離的血液及組織樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在

    20水浴箱中復(fù)溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20±2時分離效果,且

    所有操作過程一定要在無菌條件下進行。

    C 由于各品牌離心機的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季差異,可能影響分離

    效果,用戶可調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)及離心時間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。

    D 使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

    E *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑體積。

    F 分離過程中所用其他試劑如:羥乙一基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及

    紅細胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇,本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無菌、無病毒、無支原體、

    低內(nèi)毒素水平且無細胞毒性,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。

    四、、、、 產(chǎn)品性能指標

    pH 7.0-7.5

    滲透壓 280-340mOsmol/kg

    內(nèi)毒素 0.5...EU/ml

    無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清

    澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

    五、、、、 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限

    18-25避光保存,有效期兩年。啟封后置 4保存,有效期一周。

    注::::若保證無微生物污染,啟封后可置 4長期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

    貨號                     品牌              產(chǎn)品名稱          規(guī)格         報價

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