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    丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量試劑盒說明書

    提 供 商: 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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    詳細(xì)介紹

    丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量試劑盒說明書

    可見分光光度法

    正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

    測(cè)定意義:

    氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質(zhì);后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,其中包括 MDA。通過檢測(cè) MDA 的水平即可檢測(cè)脂質(zhì)氧化的水平。

    測(cè)定原理:

    MDA 與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在 532nm有大吸收峰,進(jìn)行比色后可估測(cè)樣品中過氧化脂質(zhì)的含量;同時(shí)測(cè)定 600nm 下的吸光度,利用 532nm與 600nm 下的吸光度的差值計(jì)算 MDA 的含量。

    需自備的儀器和用品:

    可見分光光度、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

    試劑的組成和配置:

    提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存;

    注意事項(xiàng):

    臨用前注意試劑一是否*溶解,如未溶解,可以 70℃加熱,并振蕩以促進(jìn)溶解。

    MDA 提取:

    1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

    細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

    組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,

    加入 1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

    2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

    測(cè)定步驟:

    1、吸取 0.6mL試劑一于1.5mL 離心管中,再加入0.2mL 樣本, 混勻。

    2、95℃水浴中保溫 30min(蓋緊,防止水分散失),置于冰浴中冷卻,10000g,25℃,離心

    10min。

    3、吸取上清液于1mL玻璃比色皿中,測(cè)定532nm和600nm處的吸光度,記為A532 和A600,

    ΔA= A532-A600。蒸餾水調(diào)零

     

     

    MDA 含量計(jì)算:

    1、血清(漿)中 MDA 含量的計(jì)算:

    MDA 含量(nmol/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=25.8×ΔA

    2、細(xì)菌、細(xì)胞或動(dòng)物組織中 MDA 含量計(jì)算

    (1)按照蛋白濃度計(jì)算

    MDA 含量(nmol/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣)=25.8×ΔA ÷Cpr

    需要另外測(cè)定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。

    (2)按照樣品質(zhì)量計(jì)算

    MDA 含量(nmol/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)

    =25.8×ΔA ÷W

    (3) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

    MDA 含量(nmol/104 )=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)

    =0.0516×ΔA

    V 反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:丙二醛摩爾消光系數(shù),155×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.2 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬。

     

     

    實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

     

    免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

    實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

     

    透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

    核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

    RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

    酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

    雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

    喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

    組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

     

    染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

     

    多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

    免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    蛋白相互作用分析

    堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

    (Label-free)

     

    DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

    掃描電鏡服務(wù)

    NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

     

    慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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