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    炭疽桿菌(BA)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR 法)

    提 供 商: 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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    詳細(xì)介紹

    炭疽桿菌(BA)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR )

    【產(chǎn)品名稱】

    將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反

    應(yīng)管中,蓋好管蓋,勻,短暫離心。

    通用名稱:炭疽桿菌(BA)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR )

    Name

    Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method)

    4  擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

    4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管于熒光定量  PCR  儀反應(yīng)槽內(nèi);

    4.2 設(shè)好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)25μL;

    熒光通道選擇:  檢測(cè)通道(Reporter DyeFAM, 淬滅通道(Quencher Dye

    NONE,ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 比熒光,選擇 None  即可。

    【包裝規(guī)格】48T/

    【預(yù)期用途】

    炭疽是由炭疽桿菌(Bacillus Anthracis, BA)感染引起的一種人獸共患病。BA

    在環(huán)境中形成芽孢,可長(zhǎng)期、穩(wěn)定地存在于自然界中。由于 BA  的穩(wěn)定性及其致

    病性,易引發(fā)突發(fā)公共衛(wèi)生事件。目前的 BA  檢測(cè)方法主要基于病原體的培養(yǎng)、染色

    鏡檢、血清學(xué)檢測(cè)等,但這些方法均適合早期的快速偵檢?;诤怂釞z測(cè)的熒光-PCR

    技術(shù),因其靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、特異性好,可快速檢測(cè)炭疽病原,及時(shí)控制炭疽疫

    4.3  推薦循環(huán)數(shù)設(shè)

    步驟

    循環(huán)數(shù)

    溫度

    95

    94℃

    55

    時(shí)間

    收集熒光信號(hào)

    1

    1 cycle

    10min

    15sec

    30sec

    [1]

    。

    2

    40 cycles

    本試劑盒適用于檢測(cè)皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌,用于

    炭疽桿菌感染的輔助診斷。

    5  結(jié)果分析判定

    6.1結(jié)果分析條件設(shè)定

    【檢驗(yàn)原

    [2-3]

    ,用熒光 PCR  技術(shù)對(duì)炭疽

    設(shè) Baseline Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)

    整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline start (一般可在 3~15  范圍內(nèi)調(diào)

    節(jié))、stop (一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold Value (上下拖動(dòng)

    閾值線至高于陰性對(duì)照),新分析結(jié)果。

    本試劑對(duì)炭疽桿菌特異性基因設(shè)計(jì)引物和熒光探針

    桿菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

    【試劑組成】

    7結(jié)果判斷

    核酸提取液

    酶液

    1.5mL×2  管

    50μL×1 管

    1.0mL×1 管

    50μL×1 管

    250μL×1 管

    陽性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0,丏曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。

    可疑:檢測(cè)通道 Ct >35.0,丏出現(xiàn)明顯擴(kuò)增曲線的樣本建議復(fù)試驗(yàn),復(fù)試

    驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0  和明顯擴(kuò)增曲線者為陽性,否則為陰性。

    陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果無 Ct  值丏無明顯的擴(kuò)增曲線。

    BA  反應(yīng)液

    BA  陽性質(zhì)控品

    陰性質(zhì)控品

    8 檢測(cè)方法的局限性

    注:

    1同批號(hào)試劑用。

    Ø  樣本檢測(cè)結(jié)果不樣本收集、處、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

    Ø  樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

    Ø  陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

    Ø  病原體在流行過程中基因突變、組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

    Ø  同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

    Ø  試劑運(yùn)輸,保存當(dāng)或試劑配制準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定

    量檢測(cè)準(zhǔn)確的結(jié)果;

    2)試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測(cè)次數(shù)。

    【儲(chǔ)存條件及有效期】

    -20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融數(shù)超過 5 次,有效期 12  個(gè)月。

    【適用儀器】

    ABI  、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Radeppendorf  等系列

    熒光定量 PCR  檢測(cè)儀。

    Ø  本檢測(cè)結(jié)果僅供考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

    9.  質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

    【標(biāo)本采集】

    陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct  值顯示;

    陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,丏 Ct  值≤32;

    以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

    皮膚炭疽,取水泡液 1mL;肺炭疽,采集咽拭子標(biāo)本,放入標(biāo)本采集管中;腸炭

    疽,取糞便  1g

    【保存和運(yùn)輸】

    上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可-70℃,但能超過 6  個(gè)月,標(biāo)本

    運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

    【注意事項(xiàng)】

    Ø  所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

    Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*并短暫離心;

    Ø  反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

    【使用方法】

    1.  樣品處(樣本處區(qū))

    Ø 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

    Ø  使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服;

    Ø 樣本處、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

    Ø 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處工作臺(tái)和移液器;

    Ø  試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通

    則》進(jìn)行處

     

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