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    葡萄糖含量試劑盒說明書

    提 供 商: 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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    葡萄糖含量試劑盒說明書

    微量法

    正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

    測(cè)定意義:

    葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言,葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組

    織等的WEI一能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。

    測(cè)定原理:

    葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。

    需自備的儀器和用品:

    可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水

    試劑的組成和配制:

    試劑一:0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑二:液體 10ml×1 瓶,4℃保存;

    試劑三:液體 10ml×1 瓶,4℃保存;

    葡萄糖提?。?/span>

    1、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),研磨成勻漿,冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次后,8000g,25℃離心10min,取上清液備用。

    2、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL蒸餾水),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次),95℃水浴10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。

    3、其他類液體,離心后可直接取上清檢測(cè)。

    測(cè)定步驟:

    1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505nm,蒸餾水調(diào)零。

    2、混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合,用多少配多少。

    3、加樣表(在EP管或96孔板中加入下列試劑):

    試劑(μL)

    空白管

    標(biāo)準(zhǔn)管

    測(cè)定管

    樣本

     

     

    20

    試劑一

     

    20

     

    蒸餾水

    20

     

     

    混合試劑

    180

    180

    180

    混勻,置 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25'C(其它物種)保溫 15min 后,于 505nm 波長(zhǎng)處讀取吸光

    度??瞻坠?、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光值分別記為 A1、A2 和 A3??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

    葡萄糖含量計(jì)算:

    1、按樣本蛋白濃度計(jì)算

    葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)

    =0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr。

    2、按樣本鮮重計(jì)算

    葡萄糖含量(µmol/g 鮮重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

    =0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

    3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

    葡萄糖含量(µmol/104cell)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)

    =0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)

    C 標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.5µmol/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL;

    Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

    注意:低檢測(cè)限為 50nmol/g  鮮重或 0.5nmol/mg prot

     

     

    實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

    ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

    CCK8檢測(cè)

    基因組DNA提取

     

    蛋白相互作用分析

    Western Blot

     

    免疫組化

    熒光定量PCR

    動(dòng)物模型服務(wù)

    流式細(xì)胞檢測(cè)

    細(xì)胞增殖

    激光共聚焦

    DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

    細(xì)胞劃痕

    鈣離子濃度檢測(cè)

    掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

    microRNA 測(cè)序

    動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

    Taqman探針

    ATP/ADP檢測(cè)

     

    石蠟/冰凍切片

    定點(diǎn)突變

    線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

    細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

    藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

     

    免疫共沉淀

    真核表達(dá)載體構(gòu)建

    染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

    非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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