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魚全血淋巴細(xì)胞分離液LTS1080F

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  魚全血淋巴細(xì)胞分離液說明書

  【產(chǎn)品規(guī)格】
  200ml/Kit
  【產(chǎn)品組成】
  為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

  	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
  A	魚全血淋巴細(xì)胞分離液		200ml
  B	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
  C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
  D	說明書

  【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
  A．適用儀器
  zui大離心力可達(dá)1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
  B．耗材

  產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號	產(chǎn)地
  15ml離心管散裝	339650	美國  NUNC
  15ml離心管架裝	339651	美國  NUNC
  50ml離心管散裝	339652	美國  NUNC
  50ml離心管架裝	339653	美國  NUNC
  無菌膠頭滴管或塑料滴管

  【檢驗(yàn)方法】
  全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。
  首先取抗凝血按體積比 1:1的比例與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）混勻，根據(jù)
  稀釋后的樣本量大小，分以下兩種情況：
  情況 A：稀釋后的血液樣本量小于 5ml時，實(shí)驗(yàn)方法如下：
  1.取一支15ml離心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液（注：分離液zui少不得少于  3ml）。
  2.用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上，400-500g，離心20-30min（注：
  根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離
  心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到*分離效果）。
  3.離心后，此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴
  細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
  4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一15ml離心管中，往所得離心管中
  加入10ml清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞。
  5. 250g，離心 10min。
  6.棄上清。
  7.用吸管以5ml清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。
  8. 250g，離心 10min。
  9.重復(fù)6、7、8，棄上清后以 0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
  情況 B：稀釋后的血液樣本量大于等于5ml時，實(shí)驗(yàn)方法如下：
  1.取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液。
  2.將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上，550-650g（zui大離心力可至1000g），
  離心20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心
  時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到*分離效果。加入血液樣本后，樣
  本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。
  3.剩余步驟同“情況A”中步驟 3至步驟  9。
  【注意事項(xiàng)】
  1.全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，zui
  好在取血 2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過6h后
  分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
  2.本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離
  心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面
  會變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。
  3.吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒
  細(xì)胞數(shù)量增加。
  4.吸取過多的淋巴細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
  5.如所實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低，請上海研謹(jǐn)生物以尋求幫助。
  【儲存條件及有效期】
  18-25℃保存，有效期 2年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
  封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
  【參考值（參考范圍）】
  本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度均大于80%。
  下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
  
  【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
  1.所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
  2.所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
  3.所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法
  A.流式細(xì)胞技術(shù)
  B.免疫組化技術(shù)
  C.原位雜交技術(shù)
  D.PCR技術(shù)
  注：上述技術(shù)方案詳情請登陸上海研謹(jǐn)生物公司搜索細(xì)胞分離、
  純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”，并在說明書項(xiàng)目欄下下載使用。
  【可能存在的問題及解決方法】
  1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

  出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案
  離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
  離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
  離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度
  離心后白環(huán)層太淺或看不	細(xì)胞密度過小	調(diào)整細(xì)胞密度

  2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
  區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，恒定離
  心時間，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
  3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可
  能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
  注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù)，直至達(dá)到*分離效果，
  離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min為準(zhǔn)。