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    人臟器組織淋巴細(xì)胞分離液KIT說明書
    點(diǎn)擊次數(shù):2008 更新時(shí)間:2015-11-16

    人臟器組織淋巴細(xì)胞分離液KIT說明書
    【產(chǎn)品規(guī)格】
    200ml/Kit
    【產(chǎn)品組成】
    為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:


    名稱產(chǎn)品規(guī)格編號
    A組織淋巴細(xì)胞分離液
    200ml
    B樣本稀釋液(贈品)2010C1119200ml
    C清洗液(贈品)2010X1118200ml
    DF液(贈品)F2013TBD200ml
    E說明書
    1份

    【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
    A.適用儀器
    zui大離心力可達(dá) 1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
    B.耗材

    產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號產(chǎn)地
    15ml離心管散裝339650美國  NUNC
    15ml離心管架裝339651美國  NUNC
    50ml離心管散裝339652美國  NUNC
    50ml離心管架裝339653美國  NUNC
    無菌膠頭滴管或塑料滴管

    【檢驗(yàn)方法】
    全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
    1.首先制備組織單細(xì)胞懸液,制備方法詳見“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)"。
    2.取一支15ml離心管,加入與組織單細(xì)胞懸液等量的分離液(注:分離液zui少不得少于
    3ml)。
    3.用吸管小心吸取組織單細(xì)胞懸液加于分離液液面上,400-500g,離心20-30min。(注:
    根據(jù)組織單細(xì)胞懸液量確定離心條件,組織單細(xì)胞懸液量越大,離心力越大,離心時(shí)間
    越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果)。
    4.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋
    巴細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
    5.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向離心管中加入
    10ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。
    6.250g,離心 10min。
    7.棄上清。
    8.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
    9. 250g,離心 10min。
    10.重復(fù) 7、8、9,棄上清后以 0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
    【注意事項(xiàng)】
    1.全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,zui
    好在取樣 2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),樣品存放時(shí)間越長,細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過6h后
    分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
    2.本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離
    心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面
    會變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
    3.吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒
    細(xì)胞數(shù)量增加。
    4.分離液用量大于組織單細(xì)胞懸液樣本時(shí),分離效果更佳。
    5.如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低,請上海研謹(jǐn)生物以獲得和幫助。
    【儲存條件及有效期】
    18-25℃保存,有效期 2年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
    封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
    【參考值(參考范圍)】
    本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度大于 80%。
    【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
    1.組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。
    2.所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
    3.所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
    4.所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法
    A.流式細(xì)胞技術(shù)
    B.免疫組化技術(shù)
    C.原位雜交技術(shù)
    D.PCR技術(shù)
    注:上述技術(shù)方案詳情請登陸上海研謹(jǐn)生物科技公司搜索“細(xì)胞分離、
    純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊",并在說明書項(xiàng)目欄下下載使用。
    【可能存在的問題及解決方法】
    1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

    出現(xiàn)情況出現(xiàn)原因建議解決方案
    離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
    離心后目的細(xì)胞存在于分離液中轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
    離心后白環(huán)層彌散細(xì)胞密度過大調(diào)整細(xì)胞密度
    離心后白環(huán)層太淺或看不見細(xì)胞密度過小調(diào)整細(xì)胞密度

    2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
    區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離
    心時(shí)間,對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
    3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
    能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
    注:在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù),直至達(dá)到分離效果,
    離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。

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