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    Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞說明書
    點(diǎn)擊次數(shù):10126 更新時(shí)間:2015-05-27

     

    Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞說明書

     

    Rosetta(DE3) Competent Cell

    Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

    目錄號:YJ0811

     

    保存條件:-80℃保存。

     

    組分說明

     

                   Cat. No.                              YJ0811A

                   Size                                   10×100 μl

                   Rosetta (DE3) Competent Cell           10×100 μl

                   Control DNA pUC19,0.1 ng/μl              10 μl

     

    產(chǎn)品簡介

     

      本產(chǎn)品是采用進(jìn)口Rosetta菌株,經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA

    的熱擊轉(zhuǎn)化。Rosetta菌株是攜帶氯霉素抗性質(zhì)粒BL21的衍生菌,補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的

    6種稀有密碼子( AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA)對應(yīng)的tRNA,提高外源

    基因,尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。使用  pUC19質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可

    達(dá)10 7

     

     

    本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

     

     

        注意事項(xiàng)

     

        1.感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在  -80℃下保存,不可多次凍融和放

           置時(shí)間過長,以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

        2.轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作。

        3.包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA,供對照試驗(yàn)使用。

     

        操作步驟

     

        1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。

           以下實(shí)驗(yàn)以50 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

        2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量

           的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。

        3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。

        4.每個(gè)離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

        5.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,

           倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

    注意:1)涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少,可通過離心(4,000 rpm,2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。

     

           2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

           3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

     

     

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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