性欧美熟妇,综合另类人妻,人妻系列免费无码专区,久久精品蜜芽,亚洲色婷婷在线

  1. 當(dāng)前位置:
    首頁 > 技術(shù)文章 > siRNA轉(zhuǎn)染試劑說明書
    目錄導(dǎo)航 Directory
    服務(wù)熱線
    技術(shù)支持Article
    siRNA轉(zhuǎn)染試劑說明書
    點(diǎn)擊次數(shù):2334 更新時(shí)間:2015-05-08

     

    siRNA轉(zhuǎn)染試劑說明書

                                                     

    貨號:YJ0871

    保存:2-8℃

     

    組分說明

     

       Catalog no.                YJ0871           YJ0871A

       Kit Size                  0.5 ml             1 ml

     

    siRNA Transfection Reagent         0.5 ml           1 ml

     

    產(chǎn)品簡介

     

             siRNAFect 是一種的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。適用于多種細(xì)胞的 siRNA  轉(zhuǎn)染,其原理為帶正電的脂質(zhì)體通過靜電作用結(jié)合到 RNA  的磷酸骨架上形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物,將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加到細(xì)胞上可以與帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面結(jié)合即可通過胞吞作用將 siRNA 導(dǎo)入細(xì)胞中。主要應(yīng)用于 RNAi  研究,基因表達(dá)和基因功能研究等。

     

    注意事項(xiàng)

     

     1.  轉(zhuǎn)染試劑使用前請先震蕩搖勻。

     

     2.  轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞密度有很大關(guān)系,不同實(shí)驗(yàn)間應(yīng)應(yīng)保持一個基本的傳代步驟,且應(yīng)確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。一般貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染的*細(xì)胞密度是70-90%,懸浮細(xì)胞的*細(xì)胞密度為2-4x106 細(xì)胞/ml,用于轉(zhuǎn)染的*細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或用途而異。  

     

     

    使用方法

     

        以下操作步驟以12孔板為例,其他孔板按照表1中所列用量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

     

      1.  在12孔板的每孔中加入1  ml正常生長培養(yǎng)基(根據(jù)需要可加入適量的血清),接種1-3x10  細(xì)胞。在37℃條件下培養(yǎng)細(xì)胞濃度至70-90%。根據(jù)細(xì)胞類型的不同,這一過程通常需要18-24小時(shí)不等。由于轉(zhuǎn)染效率培養(yǎng)條件及其敏感,所以應(yīng)在不同的實(shí)驗(yàn)間建立一個標(biāo)準(zhǔn)的傳代流程。

     

      2.  將20 pmol iRNA溶于終體積為50 μl的無血清,無抗生素的培養(yǎng)基中,渦旋5秒或者用槍盡量吹打均勻。

     

      3.  將2.6  μl轉(zhuǎn)染試劑稀釋到終體積為50 μl的無血清,無抗生素的培養(yǎng)基中,渦旋10秒。

     

          注意:溶解過程中可能會出現(xiàn)白色混濁,但不影響轉(zhuǎn)染效率。

     

      4. 將稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑加入到核酸溶液中(注意順序一定不能顛倒),渦旋1秒,室溫孵育15分鐘,使轉(zhuǎn)染試劑與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物(此步驟盡量不要超過20分鐘,否則會影響轉(zhuǎn)染效率)。

     

      5.  向穩(wěn)定復(fù)合物中加入900  μl帶血清的培養(yǎng)基,用槍輕輕吹打均勻。

     

      6.  吸去培養(yǎng)板中原有的培養(yǎng)基,加入步驟5中混合好的培養(yǎng)基。在37℃條件下培養(yǎng)細(xì)胞24-72小時(shí)。

     

      7.  根據(jù)細(xì)胞類型和啟動子活性不同,在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)分析細(xì)胞抽提物,檢測報(bào)告基因活性。

     

      8.  對于穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系,在轉(zhuǎn)染72小時(shí)后,按1:10的比例在細(xì)胞中加入選擇培養(yǎng)基對已轉(zhuǎn)染的報(bào)告基因進(jìn)行篩選。

     

                                    表1:  對不同大小的細(xì)胞培養(yǎng)皿,試劑的用量

     

    培養(yǎng)板   每孔表面積  鋪板培養(yǎng)基體積  siRNA和稀釋終體積(μl)siRNA轉(zhuǎn)染試劑體積

                                 

     

    96孔         0.3        100  μl        3 pmol至10  μl     0.4  μl至10 μl

     

    24孔          2         500  μl        10 pmol至20  μl       1.3  μl至20 μl

     

     12孔          4        1 ml           20 pmol至50  μl      2.6  μl至50 μl

     

    35 mm        10         2 ml          50 pmol至100  μl       6.6  μl至100 μl

     

     6孔         10         2 ml          50 pmol至100  μl     6.6  μl至100 μl

     

      60 mm       20        5 ml     100 pmol至200  μl       13.3 μl至200 μl

     

     10 cm        60        15 ml      300 pmol至500  μl       40 μl至500 μl

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

    欧美日韩9| www.jizz.com.| 亚洲AV网站| 人妻无码在线一区| 芦溪县| 男操女网站| aV另类在线| 日韩乱码视频| 精品人妻大屁股白浆无码| 日本影院一区| 97视频在线| 国产熟女乱子伦露脸视频| 成人在线观看黄| 陵水| 亚欧无码在线观看| 蜜桃Av久久精品人人槡| 亚洲欧美人妻在线| 最新中文av| 波多野结衣一区二区不卡| 国产精品男人天堂| 沙洋县| 无码国产片| 欧美成人精品一区二区三区在线看| 亚州精品无码毛片| 大香蕉三级片| 88AV在线播放| 黑人巨大精品欧美黑白配亚洲 | 婷婷高清无码| 商丘市| 成人3D啪啪动漫| 97精品人妻一区二区三区| 91福利午夜| 人妻一级毛片| 海宁市| 加勒比熟女| 精品国产一区二区三区久久久蜜月 | 91色福利导航| 欧美人妻一区二区在线看成人精品| 国产人人摸| 久久久一本| 人妻少妇精品视频|