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    LLC+luc小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記傳代/復(fù)蘇技巧
    點(diǎn)擊次數(shù):409 更新時(shí)間:2024-08-19

    LLC+luc小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

    ,LLC/luc

    貨號(hào):YJ-0078a(LLC種屬鑒定)

    價(jià)格: 3200.0

    規(guī)格: 1x10

    細(xì)胞描述

    Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細(xì)胞系,該細(xì)胞帶有原發(fā)性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤,被廣泛用作轉(zhuǎn)移的模型,可用于研究癌癥化學(xué)治療劑的機(jī)制。

    該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

    細(xì)胞特性

    來(lái)源:小鼠肺癌組織

    形態(tài):半貼壁生長(zhǎng),混合形態(tài),有上皮細(xì)胞樣,松散貼壁或懸浮有梭形、圓形等細(xì)胞形態(tài)

    含量:含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

    規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

    用途:僅供科研使用。

    細(xì)胞篩選

    該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。        

    建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。

    初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類(lèi)推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

    一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

    1) 準(zhǔn)備:1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(推薦:YJ-0002),優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %P/S 1 %

    2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

    3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

    二.細(xì)胞處理:

    1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

    將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

    2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

     

    LLC+luc小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記.png


     

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