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    Y79 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞傳代/復(fù)蘇操作
    點(diǎn)擊次數(shù):501 更新時(shí)間:2024-03-04

    Y79 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞

    Human Retinoblastoma

    貨號(hào):YJ-h330(STR鑒定)

    價(jià)格: 2500.0

    規(guī)格: 1*10 6 

    細(xì)胞介紹

    19711月,該細(xì)胞由ReidTW及其同事從病人右眼切除的腫瘤進(jìn)行原代培養(yǎng)建立而成,此病人有很強(qiáng)的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的母系家族遺傳性。該細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),如核膜內(nèi)折、三層膜結(jié)構(gòu)、大的被膜小泡、環(huán)孔板、微管、中心粒、基粒等都與原始腫瘤相似。

    細(xì)胞特性

    1 來源:人 視網(wǎng)膜

    2 形態(tài):圓形,成簇 懸浮生長

    3 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)

    4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

    5)  用途:僅供科研使用。

    運(yùn)輸和保存

    干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

    11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

    2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

    細(xì)胞接收后的處理

    1) 收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

    2)請?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

    3) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

    4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。

    一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

    1 準(zhǔn)備1640(推薦YJ-0002)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,20%;雙抗,1%

    2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

    3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

    二. 細(xì)胞處理:

    1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

    將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

    2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

    懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞,可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài),一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×10^6個(gè)/mL(不同細(xì)胞對密度要求不同,)可以維持細(xì)胞的正常生長。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

    3 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

    Y79 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞.png


    下面T25瓶為例;

    1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

    2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

    3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

    注意事項(xiàng)

    1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

    2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

    3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

    4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

    5.客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有技術(shù)問題可以聯(lián)系技術(shù)售后我們給予解答。

    2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

    如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

     

    實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):

     



     


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