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    酶活性檢測的實驗原理介紹
    點擊次數(shù):1145 更新時間:2022-12-21
      為了檢測一種酶的催化活性,有必要首先鑒定從底物(S)到產(chǎn)物(P)轉化所包含的化學變化。迄今為止,在各種關于酶催化活性文章的相關論述中,最典型的分類方式是按照其所催化的化學反應的類型來進行的(如氧化-還原、基團轉移、消除、異構化、重排、縮合、竣化作用等)(FreyandHegeman,2007)。此外,還應該考慮是否存在機制相似的化學過程:①涉及小分子底物或大分子蛋白質(zhì)或核酸;②在溶液中易于發(fā)生或需要膜結合組分才能進行;③逆反應進行到多大的程度。在任何情況下,酶的分析圍繞著以可計量的方式將給定底物和相關產(chǎn)物的理化性質(zhì)進行區(qū)分的能力來設計。在很大程度上,類似的活性檢測方法已經(jīng)應用于這些亞群中的各種酶。在以某種已有檢測方法為基礎來為下面兩類酶計檢測方法時要慎重,即不同物種來源的同源酶或催化相關化學反應的不同的酶。酶活性檢測的中心主題是確保初始速率的測定。為了重申這一要點,常見的和較好的做法是,在具有小于等于5%產(chǎn)物轉化的時間內(nèi)測定反應物減少或產(chǎn)物生成的初始速率。這種做法可以給出在初始底物濃度條件下的接近起始反應速率的值。
    酶的量或濃度可以用摩爾量表示,或者用酶單位的活性表示。
      酶活力=每單位時間轉化的底物摩爾數(shù)=速率×反應體積。酶活性是存在的活性酶量的量度,取決于的條件。SI單位是katal,1 katal=1 mol/s,更實際的和常用的值是酶單位(U)=1μmol/min。1 U對應16.67 nanokatals。
      酶的比活力是另一種常見的單位,代表酶的純度。用每毫克蛋白質(zhì)所含的酶活力單位數(shù)來表示。比活力=活力U/mg蛋白。
      反應的速率是每單位時間的底物消失(或產(chǎn)物生成)的濃度。
      如果已知100%純酶的比活性,那么不純的樣品將具有較低的比活性,從而可以計算純度。

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