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    豬藍(lán)耳病毒抗體診斷試劑盒說明書
    點(diǎn)擊次數(shù):1461 更新時(shí)間:2021-12-24

    豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)說明書

    【產(chǎn)品名稱】

    通用名稱豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

    英文名稱:Diagnostic Kit For Antibodies To

    Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome VirusPRRSV Ab,ELISA

    【規(guī)格】

    96T×2/

    【預(yù)期用途】

    本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬藍(lán)耳病毒抗體,可用于評估感染豬的血清學(xué)診斷以及豬藍(lán)耳病毒疫苗免疫狀況分析。

    【檢驗(yàn)原理】

    本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,由包被有高純度的豬藍(lán)耳病毒抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結(jié)合,再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成包被抗+PRRSV-Ab+酶標(biāo)抗豬IgG抗體"復(fù)合物,加入顯色劑,通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比,當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后,經(jīng)酶標(biāo)儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽性,即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。

    【主要組成成份】

    1

    PRRSV抗原包被板

    96T×2

    2

    酶標(biāo)記物

    22ml

    色帽

    3

    樣本稀釋液

    50ml

    透明

    4

    PRRSV-IgG陰性對照血清

    1.5ml

    綠色帽

    5

    PRRSV-IgG性對照血清

    1.5ml

    紅色帽

    6

    顯色劑

    12ml×2

    色帽

    7

    終止液

    12ml

    藍(lán)色帽

    8

    20X濃縮洗滌液

    50ml

    白色帽

    9

    蓋板膜

    2


    10

    說明書

    1


    【自備器材】

    1酶標(biāo)儀,雙波長450/630nm濾光片

    2微量移液器(單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul

    3.水浴箱或恒溫箱

    4.微量振蕩器

    5.一次性頭(10ul,200ul

    6.去離子水

    【樣本要求】

    1本試劑檢測的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無菌采集,28貯存應(yīng)不超過一周,長期應(yīng)在-20以下保存。

    2避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。

     

    【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

    1試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,先取出置室溫30min,可以獲得最佳結(jié)果。.

    2樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40稀釋,稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。

    3配制洗滌液將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍(例:將50ml洗滌液加入950ml去離子水中)。20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正?,F(xiàn)象,放置37℃至溶解后即可。

    【檢驗(yàn)方法】

    1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測時(shí),設(shè)陰、陽性對照各2孔,分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中(可不設(shè)空白對照)。其余為樣本孔,每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗(yàn))。

    2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37溫育30分鐘。

    3洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應(yīng)板孔,靜置10s左右,直接甩出,洗滌3次,最后一次洗滌后干板內(nèi)液體。

    4加酶:每孔加酶標(biāo)記物100μl。

    5溫育:加好酶標(biāo)記物蓋板膜,置37溫育30分鐘。

    6洗板:同步驟3。

    7顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37避光反應(yīng)10分鐘。

    8終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。

    9.讀數(shù):以450nm/ 630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD值)。

    【結(jié)果判定】

    在酶標(biāo)儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD≥0.6,陰性對照孔的平均OD值必須<0.15;樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定,S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:

      S/P=(樣本OD450/630-NCx())/(PCx()-NCx()),其中NCx()表示陰性對照孔平均OD450/630值,PCx()表示陽性對照孔平均OD450/630值;

    當(dāng)樣本的S/P≥0. 2時(shí)判為陽性;樣品S/P值<0.2時(shí)判為陰性;

    若進(jìn)行大量樣本檢測時(shí),可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)結(jié)果,該軟件可登陸本公司*網(wǎng)站下載。

    【注意事項(xiàng)】

    1.本試劑盒僅供研究使用。

    2.不要使用過期的試劑盒組分,不要把不用批次的組分混合使用。

    3.使用試劑盒之前,一定要仔細(xì)閱讀說明書。

    4.本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待,試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

    5.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開,未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。

    6.應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。

    7.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

    8.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。

    【儲(chǔ)存條件及有效期】

    2℃8℃避光保存,防止冷凍,有效期12個(gè)月。

    【生產(chǎn)日期及批號】

    詳見包裝袋和外包裝盒。

     

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