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    血液RNA提取試劑盒及預(yù)防RNase污染的注意事項(xiàng)
    點(diǎn)擊次數(shù):1973 更新時(shí)間:2021-08-05

     

    血液RNA提取試劑盒()說(shuō)明書

    RNApure Blood KitDNase I

    血液RNA提取試劑盒(DNase I

    Cat. No.   K0538

    保存:DNase I、10×Reaction Buffer-20

    其它組分:室  

     

    組分說(shuō)明

     

              Cat. No.                          K0538

              Kit Size                           50

              DNase I                          1000 U

              10×Reaction Buffer        1000  μl

              Buffer RBL10×)       60 ml

              Buffer RL                             35 ml

              Buffer RW1                            40 ml

              Buffer RW2concentrate)   11 ml

              RNase-Free Water                     10 ml

              Shredder Spin Column                50

              Spin Column RM                   50

              Collection Tube1.5 ml)     50

              Collection Tube2 ml)      100

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介

     

        本試劑盒適用于從新鮮全血(用檸檬酸鹽、EDTA 或肝素等抗凝劑處理過(guò)的血液樣品)中提取總  RNA,可以處理多至1.5  ml 的全血,洗脫得到分子量大于 200 bp 的高純度 RNA,多個(gè)樣品可以在 1 小時(shí)內(nèi)同時(shí)完成。本產(chǎn)品無(wú)需 CsCl 純化的超離心步驟和 LiCl 或乙醇沉淀,不含有苯酚或氯仿等有毒溶劑,經(jīng)過(guò)純化的 RNA 有效去除血紅素、肝素等酶抑制劑和污染物,可直接用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),如 RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。

     

    注意事項(xiàng)

     

    1.  預(yù)防 RNase 污染,應(yīng)注意以下幾方面:

        1)使用無(wú) RNase 的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

        2)玻璃器皿應(yīng)在使用前于 180℃高溫下干烤 4 小時(shí),塑料器皿可在 0.5M NaOH 中浸泡 10 分鐘,用水*沖洗后高壓滅菌。

        3)配制溶液應(yīng)使用無(wú) RNase 的水。

        4)操作人員戴一次性口罩和手套,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要勤換手套。

    2.  樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則影響提取 RNA 提取得率和質(zhì)量。樣品在 Buffer RL 中,可于-70℃保存一個(gè)月。

    3.  Buffer RL 在使用前請(qǐng)加入β-巰基乙醇,1 ml Buffer RL 10  μl  β-巰基乙醇。加入β-巰基乙醇的 Buffer RL 室溫可保存 1 個(gè)月。

    4.  第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明先在 Buffer RW2 中加入無(wú)水乙醇。

    5.  使用前請(qǐng)檢查 Buffer RL 是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,可置于于 56℃水浴重新溶解。

    6.  本試劑盒不能用于加入抗凝劑的冷凍血液樣本 RNA  的提取。  

    7.  10×Buffer RBL 需在使用前將溶液用無(wú) RNase 的水進(jìn)行 10 倍稀釋,稀釋后置于 2-8℃保存。

    自備試劑: β-巰基乙醇、無(wú)水乙醇

     

    操作步驟

     

    1.  0.5-1.5 ml  新鮮的抗凝全血樣本中,加入5倍體積的1x Buffer RBL(請(qǐng)于使用前用無(wú)RNase水將10×Buffer RBL稀釋10倍),輕輕渦旋或顛倒混勻。冰上孵育10-15分鐘,孵育過(guò)程中混勻兩次。

        注意:孵育過(guò)程中渾濁的懸液會(huì)變成透明,證明紅細(xì)胞被裂解,必要時(shí)可以把孵育時(shí)間延長(zhǎng)至20分鐘。

    2.  4℃  2,100 rpm~400×g)離心10分鐘,小心吸棄上清。

    3.  向以上沉淀中加入2倍血液樣本體積的1×Buffer  RBL(請(qǐng)于使用前用無(wú)RNase水將10×Buffer RBL稀釋10倍),輕輕渦旋,充分重懸沉淀。

    4.  4℃  2,100 rpm離心10分鐘,小心并*吸棄上清。

        注意:此步一定要*去除上清否則影響裂解導(dǎo)致RNA產(chǎn)量下降。

    5.  向沉淀中加入Buffer RL(使用前檢查是否已經(jīng)加入β-巰基乙醇),0.5-1.5 ml血液樣本加入600  μl Buffer RL,或小于0.5 ml  血液樣本加入350 μl Buffer RL,混勻。

    6.將所得液體轉(zhuǎn)移到已裝入收集管(Collection Tube)的過(guò)濾柱(Shredder Spin Column)中,12,000 rpm~13,400×g)離心2分鐘,收集濾液,棄掉過(guò)濾柱。

    7. 向所得濾液中加入1倍體積(600  μl350 μl)的70%乙醇(無(wú)RNase水配制),混勻。

        注意:加入乙醇后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀,不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    8.將上步所得溶液全部加入到已裝入吸附柱(Spin Column RM)中(已裝入收集管),若一次不能加完溶液,可分多次轉(zhuǎn)入。12,000 rpm離心15秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

    9.  向吸附柱中加入350  μl Buffer RW1,10,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

    10.  配制DNase I  混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8  μl 10×Reaction Buffer 20  μl DNase I1U/μl),混勻,  配制成終體積為80 μl的反應(yīng)液。

    11.  向吸附柱中直接加入80 ?l DNase I  混合液,20-30℃孵育15分鐘。

    12.  向吸附柱中加入350  μl Buffer RW1,10,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

    13.  向吸附柱中加入500  μl Buffer RW2(使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000 rpm離心15秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

    14.  重復(fù)步驟13。

    15.  12,000 rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘,以*晾干。

        注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR  等)。

    16.  將吸附柱置于一個(gè)新的RNase-Free1.5  ml  離心管(自備)中,向吸附柱的中間部位加入  30-50 μl  RNase-Free Water,室溫放置1分鐘,12,000 rpm離心1分鐘,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。

    注意:1RNase-Free Wate體積不應(yīng)小于30  μl,體積過(guò)小影響回收率。

    2)如果要提高RNA的產(chǎn)量,可用30-50  μl新的RNase-Free Water重復(fù)步驟16。

    3)如果要提高RNA濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復(fù)步驟16。

     

    實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

     

    免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

    實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

     

    透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

    核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

    RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

    酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

    雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

    喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

    組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

     

    染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

     

    多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

    免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    蛋白相互作用分析

    堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

    (Label-free)

     

    DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

    掃描電鏡服務(wù)

    NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

     

    慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

     

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