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    氟苯尼考檢測組織、蜂蜜、奶制品試劑盒
    點擊次數(shù):1185 更新時間:2021-07-26

                氟苯尼考

    快速檢測試劑盒說明書

    一、原理

    本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氟苯尼考將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氟苯尼考抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氟苯尼考的含量成負相關(guān),與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氟苯尼考的含量。

    二、試劑盒特性

    試劑盒靈敏度:   0.1ppb

    孵育溫度:       25℃

    孵育時間:       30min15min

    樣本檢測下限

    ···············································  0.1ppb

    ················································  5 ppb

    ···············································  0.2ppb

    交叉反應(yīng)率

    氟苯尼考·     ····································· 100%

    甲砜霉素   ········································ < 0.1%

    氟苯尼考胺  ······································  11%

    氯霉素  ············································ < 0.1%

    樣本回收率

     、蜂 蜜、牛  ······················  90%±30%

    三、試劑盒組成

    1

    微量測試孔

    每條8孔,一板12

    2

    標準液×6

    1ml/瓶)

    0ppb

    0.1ppb

    0.2ppb

    0.4ppb

    0.8ppb

    1.6ppb

    3

    酶標記物

    7ml

    紅色帽

    4

    抗體工作液

    7ml

    藍色帽

    5

    底物A

    7ml

    白色帽

    6

    底物B

    7ml

    黑色帽

    7

    終止液

    7ml

    黃色帽

    8

    20X濃縮洗滌液

    15ml

    白色帽

    9

    20X濃縮提取液

    50ml*2

    透明帽

    四、所用儀器、試劑

    具備的儀器:酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱

    微量移液器:單道 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

         劑:乙酸乙酯、正己烷、乙腈

    五、樣本前處理步驟

    樣本處理前須知

    a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

    b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

    樣本前處理需配制:

    配液1  樣本提取液:

    20X濃縮提取液用去離子水按119稀釋。(120X濃縮提取液+19份去離子水)

    配液2  牛奶樣本提取液:

    將乙腈與乙酸乙酯按 1:2 比例混合均勻(1份乙腈+2 份乙酸乙酯)。

    樣本處理:

    a)組織 (雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚等)樣本處理方法

    1、 稱取均質(zhì)后的樣本1±0.05g50ml離心管中,先加入10ml樣本提取液(配液1,振蕩2min,室溫4000r/min以上離心5min;

    2、 取出100µl上層液體加入400µl樣本提取液(配液1,混合均勻

    3、 50 µl用于分析

    樣本稀釋倍數(shù):  50

    注:如需檢測范圍包含100ppb,可在上述步驟1離心后取出100µl上層液體加入900µl樣本提取液(配液1),混合均勻;取50µl用于分析。

    此時,樣本稀釋倍數(shù)為:100

    b)蜂蜜處理方法

    1、 2±0.05 g蜂蜜,放入離心管中,用4ml去離子水溶解;加入4ml乙酸乙酯振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min;

    2、 移取2ml上層清澈液到另一離心管中,50-60℃氮氣流下干燥;用1ml樣本提取(配液1溶解干燥的殘留物,混合30s;

    3、 50 µl用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  1倍  

    c)牛奶樣本處理方法

    1、 吸取牛奶樣本1ml5ml離心管中, 加 入2ml

    牛奶樣本提取液(配液2振蕩1min,室溫  

    4000r/min以上離心10min;

    2、 取出1ml上層液體在50-60℃氮氣流中吹干;

    3、 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加1ml

    樣本提取(配液1混合30s,室溫4000r/min

    以上離心5min;去除上層有機相;

    4、 取50 µl下層相用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  2      

    六、 酶標免疫分析程序:

    測定前應(yīng)須知:

    1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025℃)。

    2、 使用之后立即將所有試劑放回28℃。

    3、 ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。

    4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

    操作步驟:

    1、 28℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

    2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃

    3、 配液:將15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照119稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

    4、 編號:將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

    5、 加標準品/樣品50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標記物50µl/孔,然后再加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。

    6、 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

    7、 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色15min。

    8、 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

    七、結(jié)果判定

    結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氟苯尼考量成負相關(guān)。

    1、粗略判定:

    用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb2.243; 0.1ppb1.816;0.2ppb1.415;0.4ppb0.740.8ppb0.313;1.6ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是0.8ppb1.6ppb;樣本2的濃度范圍是0.2ppb0.4ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實際濃度。

    2、定量分析

    1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

    百分吸光率(%)=

    B

    ×100%

    B0

    B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

    B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

    2)標準曲線的繪制與計算

    以標準品百分吸光率為縱坐標,以氟苯尼考標準品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。

     

    八、 注意事項

    1、 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫(2025℃)會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低。

    2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。

    3、 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

    4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

    5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

    6、 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

    7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。

    8、 該試劑盒Z佳反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

    9、 組織樣本若檢測結(jié)果高于80ppb,可將樣本進行再次稀釋后檢測,結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。

    九、儲藏條件和保質(zhì)期

    1、 儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。

    2、  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

    提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

     

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