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    小鼠成纖維細(xì)胞(L-929)培養(yǎng)說明書
    點擊次數(shù):2816 更新時間:2021-04-29

    小鼠成纖維細(xì)胞(L-929)培養(yǎng)說明書

     

    細(xì)胞介紹

    1948年三月建立了NCTC clone 929(小鼠結(jié)締組織),細(xì)胞系L的克隆。細(xì)胞系L是最早建立的連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞系之一,clone 929是最早的克隆株。從一只100日齡的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松結(jié)締組織入脂肪組織中建立了親本細(xì)胞系L。 第95代的細(xì)胞系L使用毛細(xì)管法分離單細(xì)胞建立了clone929。檢測發(fā)現(xiàn)鼠痘病毒陰性。

     

    細(xì)胞特性

    1) 來源:組織:皮下結(jié)締組織;疏松結(jié)締組織及脂肪 品系:C3H/An

    2) 形態(tài)成纖維細(xì)胞

    3) 含量:>1x106 /mL

    4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

    5) 規(guī)格:T75或者1mL凍存管包裝

     

    運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:1干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;2存活細(xì)胞收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

     

    細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                           

    細(xì)胞培養(yǎng)步驟

    一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

    1) 準(zhǔn)MEM培養(yǎng)基(MEM,GIBCO,貨號C11095500BT,添NaHCO3 1.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

    2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

    3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)。液氮儲存。

    二. 細(xì)胞處理

    1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中,加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

    2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

    1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細(xì)胞1-2

    2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

    3. 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

    4. 將細(xì)胞懸液按1215的比例分到新的8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

    3)細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進(jìn)行凍存。

     

    注意事項:

    1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

    2. 所有動物細(xì)胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

     

     

    實驗代做服務(wù):

     

    免疫組化IHC染色實驗服務(wù)

    細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務(wù)

    試劑盒免費代檢測

    實驗室代做實驗項目

     

    透射電鏡服務(wù)實驗服務(wù)

    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

    核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務(wù)

    免疫共沉淀(CHIRP)實驗

    RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

    酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

    雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

    喹諾酮類快速檢測試劑盒

    組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

     

    染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務(wù)

     

    多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實驗

    免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實驗服務(wù)

    ATP/ADP檢測實驗服務(wù)

    蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務(wù)

    蛋白相互作用分析

    堿性磷酸酶染色實驗服務(wù)

    PKC活性檢測實驗

    非標(biāo)定量實驗

    (Label-free)

     

    DIGE技術(shù)實驗服務(wù)

    端粒酶活性檢測實驗

    細(xì)胞生長曲線的測定

    掃描電鏡服務(wù)

    NF-KB p65活性檢測實驗

     

    慢病毒包裝實驗服務(wù)

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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