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    兔仙臺病毒(HVJ)ELISA檢測試劑盒使用說明書
    點擊次數(shù):1156 更新時間:2021-04-25

    本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷

    兔(Rabbit)仙臺病毒(HVJ)ELISA檢測試劑盒使用說明書

    檢測原理

    試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被仙臺病毒(HVJ)抗體的包被微孔中,依次加入標本、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中兔仙臺病毒(HVJ)的存在與否。

    樣品收集、處理及保存方法

    1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

    2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

    3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

    4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

    5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    自備物品

    1. 酶標儀(450nm)

    2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

    3. 37℃恒溫箱

    操作注意事項

    1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。

    2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

    3.  預處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當稀釋以達到試劑盒的的最佳檢測效果。

    4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

    5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

    試劑盒組成

    名稱

    96孔配置

    48孔配置

    備注

    微孔酶標板

    12孔×8條

    12孔×4條

    陰性對照

    0.5mL

    0.5mL

    陽性對照

    0.5mL

    0.5mL

    檢測抗體-HRP

    10mL

    5mL

    20×洗滌緩沖液

    25mL

    15mL

    按說明書進行稀釋

    樣本稀釋液

    6mL

    3mL

    底物A

    6mL

    3mL

    底物B

    6mL

    3mL

    終止液

    6mL

    3mL

    封板膜

    2張

    2張

    說明書

    1份

    1份

    自封袋

    1個

    1個

     

    試劑的準備

     20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

    洗板方法

    1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

    2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

    操作步驟

    1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2.  設置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;

    3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;

    4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

    6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

    結果判斷

     1.  試驗有效性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;

                    陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

    2.  臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

    3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

    4.  陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性

    試劑盒性能

    1.  準確性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗結果有效。

    2.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

    3.  重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

    4.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

    5.  有效期:6個月

     

    實驗代做服務:

     

    免疫組化IHC染色實驗服務

    細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

    試劑盒免費代檢測

    實驗室代做實驗項目

     

    透射電鏡服務實驗服務

    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

    核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務

    免疫共沉淀(CHIRP)實驗

    RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

    酶聯(lián)免疫(ELISA)技術服務

    雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

    喹諾酮類快速檢測試劑盒

    組織芯片/微陣列定制技術服務

     

    染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

     

    多因子液相芯片技術(Luminex)實驗

    免疫細胞化學ICC實驗服務

    ATP/ADP檢測實驗服務

    蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

    蛋白相互作用分析

    堿性磷酸酶染色實驗服務

    PKC活性檢測實驗

    非標定量實驗

    (Label-free)

     

    DIGE技術實驗服務

    端粒酶活性檢測實驗

    細胞生長曲線的測定

    掃描電鏡服務

    NF-KB p65活性檢測實驗

     

    慢病毒包裝實驗服務

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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