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    人食管癌細胞(Eca-109)培養(yǎng)說明書
    點擊次數:2487 更新時間:2021-03-22

    人食管癌細胞(Eca-109)培養(yǎng)說明書

     

     

     

    細胞特性

    1) 來源:食管

    2) 形態(tài)上皮細胞

    3) 含量:>1x106 /mL

    4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

    5) 規(guī)格:T75或者1mL凍存管包裝

     

    運輸和保存:使用含有優(yōu)質胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后,1000RPM,常溫條件離心5min,潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基轉移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

     

    細胞用途:僅供科研使用。

                           

    細胞培養(yǎng)步驟

    一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準備:

    1) 準備RPMI-1640養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。

    2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

    3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用。液氮儲存。

    二. 細胞處理

    1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

    2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,可進行傳代培養(yǎng)

    對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

    1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2。

    2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

    3. 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

    4. 將細胞懸液按1215的比例分到新的8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

    3)細胞凍存:細胞生長狀態(tài)良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存。

     

    注意事項:

    1. 收到細胞后,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

    2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性,必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

     

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    滬公網安備 31011802001676號

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