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    細(xì)菌蛋白抽提試劑盒操作說(shuō)明書
    點(diǎn)擊次數(shù):1968 更新時(shí)間:2020-12-24

     

     

    Bacterial Protein Extraction Kit

     

    細(xì)菌蛋白抽提試劑盒

     

     

     

    保存條件:Lysozyme、DNase、Protease Inhibitor Cocktail-20℃,其它組分:室溫

     

    產(chǎn)品內(nèi)容

     

    Component

    K0888S

    K0888M

    25 preps

    100 preps

     

    Bacterial Protein Extraction Reagent

    25 ml

    100 ml

    Protease Inhibitor Cocktail

    250 μl

    1 ml

    Lysozyme 50 mg/ml

    50 μl

    200 μl

    DNaseⅠ(1,000 U/ml

    25 μl

    100 μl

     

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介

     

    細(xì)菌蛋白抽提試劑使用溫和的非離子型去污劑,適用于大腸桿菌及昆蟲細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白提取。提取過(guò)程中不需進(jìn)行超聲破碎,有效避免了外源蛋白的污染。本產(chǎn)品可應(yīng)用于從細(xì)菌裂解液中提取可溶性蛋白。細(xì)菌蛋白抽提試劑盒在抽提試劑的基礎(chǔ)上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制劑混合物,可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現(xiàn)象,有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物學(xué)活性,可進(jìn)行IP、Western blot、蛋白純化等下游操作。

     

    注意事項(xiàng)

     

    1.本產(chǎn)品適用于從新鮮或凍存細(xì)菌和昆蟲細(xì)胞中提取蛋白。

     

    2.本品采用Tris緩沖系統(tǒng),蛋白提取后的純化操作,請(qǐng)使用相同的緩沖系統(tǒng)。

     

    3.使用本產(chǎn)品獲得的蛋白裂解液,可用BCABradford法進(jìn)行蛋白定量。

     

    4.對(duì)于特殊的菌株,如果抽提效果不理想,可在抽提蛋白前冰凍樣品。

     

    5.根據(jù)具體情況,可在本產(chǎn)品中加入蛋白酶抑制劑、鹽、螯合劑、還原劑等。

     

     

    操作步驟

     

    昆蟲細(xì)胞蛋白提取

     

    1.低速離心收集細(xì)胞。每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10 μl Protease Inhibitor Cocktail即為工作液。

    2.稱量細(xì)胞濕重,按10 ml/g的量加入工作液。

     

    3.重懸后,冰上孵育20分鐘(冰上放置時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整)。

     

    415,000×g離心15分鐘,分離可溶性蛋白。

     

    細(xì)菌可溶性蛋白提取

     

    15,000×g離心10分鐘,收集菌體。

     

    2.可選步驟:每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1 μl DNase I1,000 U/ml)、 2 μl Lysozyme50 mg/ml)和10 μl Protease Inhibitor Cocktail,渦旋震蕩混勻。

    3.按照每克菌體沉淀加入20 ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例,向菌體沉

     

    淀中加入抽提液,充分渦旋或用移液器上下吹打直至菌體*重懸。

     

    4.重懸后,室溫孵育10-15分鐘(放置時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整)。

     

    515,000×g離心5分鐘。

     

    6.轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中(上清中即為可溶性蛋白),進(jìn)行蛋白定量及下游實(shí)驗(yàn)。

     

    注意:如目的蛋白以包涵體形式存在,可使用包涵體蛋白溶解液(K0007)進(jìn)行溶解或優(yōu)化表達(dá)

     

    條件增加可溶性蛋白的表達(dá)。

     

    常見問(wèn)題

     

    問(wèn)題

    可能原因

    解決方法

    目的蛋白不溶

    目的蛋白表達(dá)為包涵體

    優(yōu)化表達(dá)條件或使用包涵體蛋白溶解液

    在蛋白抽提試劑中加入 Lysozyme 和 DNase I

     

     

    加入Lysozyme 后目的蛋白

    溫度過(guò)低

    將使用試劑恢復(fù)至室溫

    仍沒(méi)有提取出來(lái)

    Lysozyme 活性降低或失活

    加入更多的 Lysozyme 或更換新的酶

    提取物粘度高

    DNase I 活性降低或失活

    加入更多的 DNase I 或更換新的 DNase I

    將鎂離子的終濃度增加至 2 mM

     

     

    蛋白抽提后仍有大部分蛋

    蛋白量過(guò)大

    加入 Lysozyme 及 DNase I

    白存在于沉淀中

     

     

    蛋白抽提試劑有沉底析出

    溫度過(guò)低

    將蛋白抽提試劑恢復(fù)至室溫

     

    本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途

     

     

    實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

     

    免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

    實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

     

    透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

    核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

    RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

    酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

    雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

    喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

    組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

     

    染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

     

    多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

    免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    蛋白相互作用分析

    堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

    (Label-free)

     

    DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

    掃描電鏡服務(wù)

    NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

     

    慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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