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    磺胺多殘留快速檢測試劑盒說明書
    點(diǎn)擊次數(shù):1814 更新時(shí)間:2020-12-09

     

    磺胺多殘留快速檢測試劑盒說明書

     

    一、原理

     

    本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物磺胺類藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗磺胺類藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物磺胺類藥物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物磺胺類藥物的含量。

     

    二、試劑盒特性

    試劑盒靈敏度:  0.4ppb

     孵育溫度: 25

    孵育時(shí)間: 30min15min

     

    樣本檢測下限

     

    組 織( 檢 測 限 方 法) ··············· 0.4 ppb

     

    蜂 蜜 ················································0.4 ppb

     

    血 清 、尿 液 ··································· 1.6 ppb

     

    ·········································

    8 ppb

    u

    交叉反應(yīng)率

     

    磺胺甲基嘧啶(SM1  ) ·························

    100%

    磺胺嘧啶(SD 或 SDZ·························

    130.2%

     

    磺胺間(六)甲氧嘧啶(SMM················ 181.8% 

    磺胺甲噁唑(SMZ······························ 86.6%

     

    磺胺異噁唑(SIZ·······························  76.5%

     

    磺胺噻唑(ST··································  103.3%

     

    磺胺喹噁林(SQX) ····························

    59.4%

    磺胺甲氧噠嗪(SMP) ····························

    68.6%

    磺胺氯吡嗪(Esb3)·······························

    72.1%

    磺胺氯噠嗪(SCPA)······························

    49.6%

    磺胺對甲氧嘧啶(SMD·····················  194.8%

    磺胺二甲基嘧啶(SM2····················

    79.3%

    磺胺二甲異嘧啶(SM2··················

    100.6%

    磺胺間二甲氧嘧啶(SDM·················

    140.8%

    磺胺鄰二甲氧嘧啶(SDM··············  132.1%

     

    磺胺多辛(SDM2······························  144.7%

     

    酞?;青邕颍?/span>PST································  73.9%

     

    磺胺苯酰(SML·································  104%

     

    磺胺咪(SG) ········································  0.1%

     

    由反應(yīng)交叉率可以得出:該試劑盒可用于磺胺多種殘留物的檢測,*國家磺胺類多殘留種類檢測的要求。

     

    樣本回收率

     

    織 、尿 樣、牛 奶 ···············

    85% ±25%

    蜂 蜜、血 清 ···························

    80% ±23%

    三、試劑盒組成

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    1

     

    微量測試孔

    每條 8 孔,一板 12 條

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    標(biāo)準(zhǔn)液×6 瓶

    0ppb

    0.4ppb

     

    2

     

    0.8ppb

    1.6ppb

     

     

    1ml/瓶)

     

     

     

    3.2ppb

    6.4ppb

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    3

     

    酶標(biāo)記物

    7ml

    紅色帽

     

     

     

     

     

     

     

    4

     

    抗體工作液

    7ml

    藍(lán)色帽

     

     

     

     

     

     

     

    5

     

    底物 A 液

    7ml

    白色帽

     

     

     

     

     

     

     

    6

     

    底物 B 液

    7ml

    黑色帽

     

     

     

     

     

     

     

    7

     

    終止液

    7ml

    黃色帽

     

     

     

     

     

     

     

    8

     

    20X 濃縮復(fù)溶液

    50ml

    透明帽

     

     

     

     

     

     

     

    9

     

    20X 濃縮洗滌液

    40ml

    白色帽

     

     

     

     

     

     

     

    四、所用儀器、試劑

    具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量 0.01g)、氮吹儀、刻度移液管

     

    微量移液器:單道 20µl200µl、單道 100µl1000µl、多道 30300 µl

     

    劑:乙酸乙酯、Na2HPO4·12H2O、乙qing、NaH2PO4·2H2OK2HPO4·3H2O、二氯甲wan、正己烷

     

    五、樣本前處理步驟

     

    • 樣本處理前須知

    a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

    b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    u 樣本前處理需配制:

    配液 1 0.1M K2HPO4 溶液稱取 11.4g  K2HPO4·3H2O 用去離子水500ml 溶解。配液 2 0.02M PB 緩沖液稱取 5.16g Na2HPO4·12H2O 和 0.87gNaH2PO4·2H2O 加去離子水 1L 溶解。

     

    配液 3 乙qing-二氯甲*烷混合液

     

    V 乙qing-V 二氯甲*烷  = 1 : 4

     

    配液 4 樣本復(fù)溶液:20X 濃縮復(fù)溶液用去離子水 119 稀釋。

    • 樣本處理:

     

    a)組織高檢測限處理方法一

    1、稱 2.0±0.05g 均質(zhì)過的組織樣本于 50ml 離心管中;加入 8ml 乙qing-二氯甲*烷混合液,振蕩 2min4000r/min 以上,15℃離心 10min;

    2、取 4ml 清澈有機(jī)相至干燥容器中,50-60℃氮?dú)?/span>或空氣吹干;3、用 1ml 樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物,加入正己烷 1ml?;旌?30s,4000r/min 以上 15℃離心5min;去除上層正己烷;4、取下層 50µl 液體用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  1 倍

     

    b)組織高檢測限處理方法二

     

    1、稱取 3±0.05g 勻漿物置離心管中,先加入 3ml0.02M PB 緩沖液充分振蕩混勻,再加入 4ml 乙酸乙酯和 2ml 乙qing,充分振蕩 10min,于 154000r/min 以上速度離心 10min;

    2、移取 2ml 上層液體(約相當(dāng)于 1g 的樣本)在50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

    3、加入 1ml 正己烷溶解干燥的殘留物,再加入 1ml 樣本復(fù)溶液強(qiáng)烈振蕩 1min,室溫 4000r/min,離心 5min,除去上層正己烷;

    4、取下層 50µl 液體用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  1 倍

     

    c)血清處理方法

     

    1、將血樣本于室溫放置 30min,于 10℃,4000r/min以上離心 10min,分離出血清或過濾血清;

     

    2、取 1ml 血清,加入 3ml 0.02 M PB 緩沖液混合,混合 30s3、取 50µl 液體用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  4 倍

     

    d)蜂蜜處理方法

     

    1、稱取 2±0.05g 蜂蜜樣本于 50ml 離心管中,加入2ml 0.1M K2HPO4 溶液,渦旋震蕩 2min;

     

    2、再加入8ml 乙酸乙脂,渦旋振蕩3min,4000r/min以上 15℃離心 10min;3、取 4ml 上層液體于 56℃下氮?dú)獯蹈?,?/span> 1ml 本復(fù)溶液復(fù)溶,渦旋震蕩 1min;4、取 50µl 液體用于分析。

     

    樣本稀釋倍數(shù):  1 倍

     

    e)尿液處理方法

     

    1、用 3ml0.02 M PB 緩沖液與 1ml 經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合,混合 30s;2、取 50µl 液體用于分析。

     

    樣本稀釋倍數(shù):  4 倍

     

    f)牛奶處理方法

     

    1、取 1ml 牛奶樣本用 0.02 M PB 緩沖液按 119v/v)稀釋(即 20µl 牛奶+380µl 0.02 M PB 緩沖液),混合 30s;2、取 50µl 液體用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  20 倍

     

    六、酶標(biāo)免疫分析程序:

     

    • 測定前應(yīng)須知:

     

    1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫2025℃)。

     

    2、 使用之后立即將所有試劑放回 28℃。

    3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點(diǎn)。

    4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

     

    • 操作步驟:

     

    1、從 28℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

    2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于 2-8℃。

     

    3、配液:將 40ml 20X 濃縮洗滌液用去離子水稀釋800ml。

    4、編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

    5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標(biāo)記物 50µl/孔,然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔,用蓋板膜封板,25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。

    6、將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 45 次,每次間隔 1530 秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

    7、顯色:加入底物 A  50µl/孔,再加入底物 B 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色 15min。8、測定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處(建議用雙波長 450/630n m 檢測,5min 內(nèi)讀數(shù)),測定每孔 OD 值。

    七、結(jié)果判定

    結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含磺胺類藥物量成負(fù)相關(guān)。

    1、粗略判定:

    用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3,樣本 2 的吸光度值為 1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:

    0ppb  2.243; 0.4ppb  1.816;0.8ppb  1.415; 1.6ppb  0.74;3.2ppb  0.3136.4ppb  0.155。

    則樣本 1 的濃度范圍是 3.2ppb6.4ppb;樣本 2 的濃度范圍是 0.8ppb1.6ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺類藥物實(shí)際濃度。

    2、定量分析

    1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第-個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以 100%,即

     

    百分吸光度值(%)=  B ×100%

    B0

     

    B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

    2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以磺胺類藥物

     

    標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺類藥物實(shí)際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

     

    3、單項(xiàng)磺胺類檢測結(jié)果計(jì)算

     

    將按照試劑盒計(jì)算出來的結(jié)果乘以相應(yīng)的交叉反應(yīng)率即為磺胺單項(xiàng)的檢測值。

     

    八、 注意事項(xiàng)

     

    1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

    2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

    3、混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

    4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。

    5、不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

    6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

    7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

    8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為 25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

     

    九、儲藏條件和保質(zhì)期

    1、儲藏條件:試劑盒于 28℃保存,不要冷凍。

    2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

    提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請放心使用。

     

     

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