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    Easy-Lowry蛋白定量試劑盒說明書
    點擊次數(shù):1245 更新時間:2020-10-15

      

    Easy-Lowry蛋白定量試劑盒說明書

    Easy-Lowry Protein Assay Kit

    Easy-Lowry蛋白定量試劑盒

     

    目錄號:K2341

    保存:BSA 標準品:2-8℃

    其  它 組  分:室  溫

     組分說明

     

    Cat. No.                    K2341

    Kit Size                    1000 次/微孔,50 次/試管

    試劑 A                        50 ml

    試劑 B                        25 ml

    BSA 標準品 (2 mg/ml)     2 ml

     

    產品簡介

     

        Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是一種操作簡便快捷的 Lowry 法蛋白定量試劑盒,可用于多種不同緩沖系統(tǒng)以及各種不同蛋白質的定量檢測。Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是在 Improved-Lowry 蛋白定量試劑盒基礎上進行優(yōu)化改良的產品,其保留了Improved-Lowry 抵抗干擾能力較強的優(yōu)點,并進一步簡化了操作步驟,減少了檢測時間,并且能得到與mproved-Lowry 蛋白定量接近的定量結果,其檢測范圍為 0-2000 μg/ml。

     注意事項

     1.  本產品可以采用分光光度計(試管檢測法)或者酶標儀(微孔檢測法)測定蛋白濃度。

     2.  建議每次測定蛋白樣品時,繪制標準曲線,以獲得準確數(shù)據(jù)。

     3.  BSA 標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水稀釋)。

     4.  如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表 1),可采用 Bradford 法蛋白定量試劑盒(K0013)或其他蛋白定量產品。  

     

     操作步驟

     1.  稀釋 BSA 標準品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。

     管號    稀釋液用量(μl)BSA標準品用量(μl)     BSA標準品終濃度(μg/μl)

                                                                

    A                  0                 200                       2

    B                 200                200                       1

    C                 200          200(從B管中?。?              0.5

    D                 200          200(從C管中取)              0.25

    E                 200          200(從D管中?。?             0.125

    F                200                 0                         0(空白)

     2.  稀釋試劑 B:將試劑 B 用去離子水稀釋 8 倍混勻待用。

     3.  定量檢測:

     3a.  試管檢測法(蛋白濃度檢測范圍:0-2 μg/μl)

     1)按上表,將稀釋好的 A-F BSA 標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各 200 μl分別加到作好標記的試管中。

     2)向各試管中加 1 ml 試劑 A 迅速振蕩混勻,室溫準確放置10分鐘。

     3)向各試管中加入4 ml 稀釋過的試劑 B,迅速在渦旋儀上混勻,室溫靜置30分鐘。

     4)用分光光度計測定750 nm下的吸光度值。

     5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

     3b.  微孔檢測法(蛋白濃度檢測范圍:0-2 μg/μl)

     1)按上表,將稀釋好的 A-F BSA 標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各 5 μl 分別加到作好標記的 96 孔板微孔中。

     2)向各微孔中加 50 μl 試劑 A,迅速用酶標儀振蕩混勻,室溫準確放置 10 分鐘。

     3)向每孔中加入 200 μl 稀釋過的試劑 B,迅速用酶標儀振蕩混勻,室溫靜置 30 分鐘。

     4)用酶標儀測定 750 nm 下的吸光值。

     5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

     

    注意:

     

    1)建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標準曲線。

    2)由于操作誤差導致標準品讀數(shù)嚴重偏離線性曲線的應舍去。

    3)未知樣品濃度可以從標準曲線方程中計算得出,  實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

    4)如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。  

     

                              附表 1.干擾物附表

     

        化合物               耐受濃度                化合物               耐受濃度

                              緩沖液                               去垢劑及變性劑

        磷酸鉀                0.03 M           去氧膽酸鈉               0.0625%

        甘氨酸               0.25 mM             CHAPS              1 mM

        HEPES              2.5  μM            辛葡糖                 干擾

         MES               25  μM              SDS               1.25%

        MOPS               25  μM          Triton X-100          0.25%

      Na +-檸檬酸                 2.5  μM          糖類

          

        PIPES              5  μM             葡萄糖               30 mM

        磷酸鈉               0.25  μM             蔗糖               10  μM

        螯合劑

          TES               1 mM

          Tris             250  μM             EDTA             125  μM

                               鹽類       EGTA               干擾

                                                       還原劑

        硫酸銨                28  μM

         NaCl              30  μM           β-巰基乙醇              1.75mM

         尿素                200  μM             DTT              50  μM

                                                        其他

                              極性化合物

         丙酮                 1.25%            丙烯酰胺             1.25 mg/ml

        DMSO                6.20%              DNA            190  μg/ml

         乙醇                12.50%              脂類                25mM

    1,2-亞乙基二醇               0.25%           兩性電解質                 干擾

         甘油                  25%             中性 TCA           12.5 mg/ml

     

     

    實驗代做服務:

     

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    細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

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