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    RIPA裂解液(弱)說(shuō)明書(shū)
    點(diǎn)擊次數(shù):2379 更新時(shí)間:2020-09-14

                                               

     

    RIPA裂解液(弱)說(shuō)明書(shū)

     

    RIPA Lysis Buffer

    目錄號(hào):K2335

    保存條件:4℃保存。

     

    組分說(shuō)明

     

    Cat. No.      K2335

    Volume        100 ml

     

     

    本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途產(chǎn)品簡(jiǎn)介

     

      RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細(xì)胞快速裂解液,主要用于從動(dòng)物組織和哺乳

    動(dòng)物細(xì)胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。按照其裂解液的強(qiáng)度

    可以分為強(qiáng)、中、弱三類,具體特點(diǎn)和差異請(qǐng)參考附表2,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)產(chǎn)

    品。經(jīng)RIPA裂解液(弱)提取的蛋白可應(yīng)用于蛋白定量、Western、IP等,特別適合

    于CO-IP檢測(cè)。

      RIPA裂解液裂解RIPA裂解液(弱)的主要成分為50mM  Tris(pH  7.4),150mM

    NaCl,1% NP-40,0.25% sodium deoxycholate,以及sodium orthovanadate,sodium

    fluoride,EDTA,leupeptin等多種抑制劑,可以有效抑制蛋白降解。

     

    注意事項(xiàng)

     

    1.為防止蛋白降解,所有的操作盡量在冰上進(jìn)行。

    2.使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品,可采用BCA法進(jìn)行蛋白定量,以測(cè)定蛋白濃度。

       產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),如:K0014  BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的

       去垢劑,不能用Bradford法進(jìn)行蛋白定量。

    3.建議在使用RIPA裂解液前,向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,以防止蛋

       白降解,或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),如:K2200 蛋白酶抑制劑混合物,K2383 磷酸酶抑制劑混合物。

    4.若需獲得更高濃度的蛋白,應(yīng)減少哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑的使用量。

    5.對(duì)于培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞,推薦先使用常規(guī)方法消化細(xì)胞,再參考懸浮細(xì)胞蛋白提

    取步驟操作。

    6.對(duì)于離心獲得的細(xì)胞,若不確定細(xì)胞體積,可根據(jù)細(xì)胞數(shù)量計(jì)算RIPA裂解液的使用量。如5×106個(gè)Hela細(xì)胞約需加入500 μl RIPA裂解液,以此類推。

     

    操作步驟

     

      I  細(xì)胞樣品

     · 貼壁細(xì)胞蛋白抽提

    1.小心傾去貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液。

    2.可選步驟:若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì),請(qǐng)先使用預(yù)冷的

       PBS漂洗細(xì)胞。

    3.加入適量RIPA裂解液(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑),試劑使用量請(qǐng)參考

       附表1,在冰上用槍頭吹打貼壁細(xì)胞。

     

    表 1   貼壁細(xì)胞RIPA 裂解液使用量推薦表

                細(xì)胞培養(yǎng)板類型或培養(yǎng)面積                  RIPA  裂解液使用量

                         100 mm*                         500-1,000 µl

                          60 mm                          250-500 µl

                        6 孔培養(yǎng)板                          200-400 µl /孔

                       24 孔培養(yǎng)板                          100-200 µl /孔

                       96 孔培養(yǎng)板                          50-100 µl /孔

     

     * 對(duì)于100 mm培養(yǎng)板培養(yǎng)的107個(gè)細(xì)胞 (50 mg)可裂解獲得約3 mg總蛋白(細(xì)胞類型不同略有差異)。

     

    4.將裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,冰上孵育20分鐘,使細(xì)胞充分裂解。

    5.14,000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中,進(jìn)行下一步分析。

     

     · 懸浮細(xì)胞蛋白提取

    1.懸浮細(xì)胞2,500×g,離心5分鐘,棄去上清。

    2.可選步驟:若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì),請(qǐng)使用PBS漂洗

       細(xì)胞。漂洗后的細(xì)胞懸浮液2,500×g離心5分鐘,棄去上清。

    3.加入適量RIPA裂解液(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑),每5×106細(xì)胞加入約

       200-500 µl RIPA裂解液,吹打均勻。

    4.冰上放置20分鐘,使細(xì)胞充分裂解。

    5.14,000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中,進(jìn)行下一步分析。

      II  組織樣品

    1.取適當(dāng)?shù)腞IPA裂解液,在使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑。

    2.稱量實(shí)驗(yàn)組織的重量,按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA裂解液后將組織剪成細(xì)

       小碎片,用電動(dòng)勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物,可適當(dāng)減少組織蛋白

       抽提試劑使用量。

    3.冰上孵育20分鐘,使細(xì)胞充分裂解。

    4.14,000×g 離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中,進(jìn)行下一步分析。

     

       注:RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中可能會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為基因組。

        相關(guān)產(chǎn)品信息

     

                目錄號(hào)                 產(chǎn)品名稱

                K2333              RIPA裂解液(強(qiáng))

                K2334              RIPA裂解液(中)

                K2335              RIPA裂解液(弱)

                K2336              RIPA裂解液(強(qiáng)中弱套裝)

                K2337              SDS裂解液

                K0002/K0889       哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑/哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑盒

                K0004/K0891       組織蛋白抽提試劑/組織蛋白抽提試劑盒

                K0199B             Nc-細(xì)胞核/漿蛋白抽提試劑盒

                K2200              蛋白酶抑制劑混合物

                K2383              蛋白磷酸酶抑制劑混合物

                K0014              BCA蛋白定量試劑盒

                K0022              SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

                K0023              ProteinShow-G250蛋白快速染色試劑

     

     

    實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

     

    免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

    實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

     

    透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

    核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

    RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

    酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

    雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

    喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

    組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

     

    染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

     

    多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

    免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    蛋白相互作用分析

    堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

    (Label-free)

     

    DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

    掃描電鏡服務(wù)

    NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

     

    慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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