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    Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書
    點(diǎn)擊次數(shù):1986 更新時間:2020-08-24

     

    Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書

     

    Tricine-SDS-PAGE Gel Kit

    Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

     

    目錄號:K2384

     

     

    組分說明及保存條件

     

               Cat. No.          K2384

                                                保存條件

               Size             約 50塊膠

             49.5%T 3%C         30 ml               2-8ºC

             49.5%T 6%C         100 ml               2-8ºC

             凝膠緩沖液           140 ml               2-8ºC

             甘油                30 ml               室溫

             APS                0.5 g                室溫

             TEMED               750 ul           室溫,避光

     

    本產(chǎn)品所提供的 APS(過硫酸銨)為固體粉末,使用前加入雙蒸水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g  APS加5 ml雙蒸水),將溶液分裝后置于-20℃保存,通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

     

    本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

     

     

    產(chǎn)品簡介

     

      常規(guī)的Tris-SDS-PAGE電泳的只能分辨大分子蛋白,對于相對分子量小的,尤其

    是10 kD以下的蛋白分辨率極低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分離分子量在1-10 kD

    的蛋白及多肽,成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chǎn)品包括Tricine-SDS-

    PAGE凝膠制備所需全套試劑,只需自備蒸餾水,即可制備高質(zhì)量各種濃度的凝膠,方

    便、快捷,電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實驗。

     

    注意事項

     

    1.  10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定,應(yīng)盡量減少室溫存放時間,每

    次取用后立即放回冰箱,以防失效;若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間延長,應(yīng)考慮更換,使用

    -20度保存的10%APS。

    2.在凝膠配制過程中,尤其是液體混勻步驟,應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

    3.在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作,加水時速度不能太快。

    4.丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性,操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。

    5.本產(chǎn)品僅用于科研,不能用于人體實驗或人體治療。

     

    操作步驟

     

    根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,凝膠濃度配方參考附表。

     I 配制分離膠

    1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。

    2.加入10%APS和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    3.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1 mm mini-gel,分離膠溶液加約4 ml),

       然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3  cm的水層,使凝膠表面保持平整。

    4.靜置,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

     

     II 配制夾層膠

      去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水盡量吸去。

    1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

    2.加入10%過硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    3.將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對于1 mm的mini-gel,夾層膠溶液加

       約1 ml ),然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層,使凝膠表面保持平整。

    4.靜置,待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

     

    III 配制濃縮膠

    去除覆蓋在夾層膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

        1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

        2.加入10%過硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

        3.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

        4.待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。

        5.進(jìn)行電泳操作。

     

    IV 電泳

    將電泳槽放入4℃或冰水浴中,外槽加入陽極緩沖液(K2388),內(nèi)槽加入陰極緩沖液(K2387),30V預(yù)電泳10 min,將樣品(已經(jīng)過Tricine上樣緩沖液YJ2385處理)加入點(diǎn)樣孔后30V電泳1小時,100V電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳,進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。

     

     

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