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    鏈霉素快速檢測試劑盒說明書
    點擊次數(shù):1207 更新時間:2020-08-11

    鏈霉素

    快速檢測試劑盒說明書

    一、原理

    本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物鏈霉素將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗鏈霉素抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物鏈霉素的含量。

    二、試劑盒特性

    • 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
    • 孵育溫度:       37
    • 孵育時間:       30min30min15min
    • 樣本檢測下限

      ··············································  1 ppb

    雞肝、牛奶 ······································  4 ppb

     /蜂王漿 ···································  2 ppb

    • 交叉反應率

    鏈霉素  ··········································   100%

    慶大霉素  ······································· 0.1%

    雙氫鏈霉素  ····································  108%

    卡那霉素  ······································· 0.1%

    • 樣本回收率

          ····································  85±22%

    雞肉組織  ····································  80±22%

    蜂蜜/蜂王漿   ······························  75±22%

    三、試劑盒組成

    1

    微量測試孔

    每條8孔,一板12條

    2

    標準液×6瓶

    (1ml/瓶)

    0ppb

    0.1ppb

    0.4ppb

    1.6ppb

    6.4ppb

    25.6ppb

    3

    酶標記物

    12ml

    紅色帽

    4

    抗體工作液

    7ml

    藍色帽

    5

    底物A液

    7ml

    白色帽

    6

    底物B液

    7ml

    黑色帽

    7

    終止液

    7ml

    黃色帽

    8

    20X濃縮洗滌液

    40ml

    白色帽

    9

    10X濃縮復溶液

    50ml

    透明帽

    四、所用儀器、試劑

    具備的儀器:酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱、恒溫水浴鍋

    微量移液器:單道 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

          劑:氫氧化鈉、乙腈、正己烷、三氯yi

    五、樣本前處理步驟

    • 樣本處理前須知

    a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

    b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結果。

    • 樣本前處理需配制:

    配液1  0.5%三氯yi酸溶液

    0.5g三氯乙suan加去離子水定容100ml。

    配液2  3%三氯乙suan溶液

    3g三氯乙suan加去離子水定容100ml。

    配液3  1M NaOH溶液:

    4g NaOH加去離子水定容至100ml。

    配液4  0.1M NaOH溶液:

    0.4g NaOH加去離子水定容至100ml

    配液5  樣本復溶液:

    10X濃縮復溶液用去離子水19稀釋。

    • 樣本處理:

    a)牛奶處理方法

    • 取牛奶1ml,按1:39稀釋,混合30s。(50µl牛奶+1950µl樣本復溶液)
    • 50µl用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  40 

    b)雞肉處理方法

    • 2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本,4ml 3%三氯yi酸,充分混勻2min; 室溫4000r/min以上,離心10min;
    • 取上清液100µl,加入100µl0.1M NaOH,再加入300 µl樣本復溶液,充分混勻;
    • 50µl用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  10 

    c)雞肝處理方法

    • 2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本,6ml 0.5%三氯yi酸和2ml乙腈,充分混勻5min;
    • 室溫4000r/min以上,離心10min;
    • 2ml上清液加入2ml正己烷,充分混勻靜置3min,取0.5ml下層清亮液體,室溫4000r/min以上,離心5min;
    • 50µl下層清亮液(若有分層,須去除掉上層液體取下層清亮液體),加入450µl樣本復溶液混勻,混合30s;
    • 50µl用于分析。

        樣本稀釋倍數(shù):  40

    d)蜂蜜、蜂王漿處理方法

    • 稱量1±0.05g 樣本加入2ml 去離子水,振蕩至*溶解;
    • 室溫4000r/min以上離心10 min。
    • 100µl上清液,加入400µl樣本復溶液混勻,混合30s;
    • 50µl用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù): 10 

    六、 酶標免疫分析程序:

    • 測定前應須知:
    • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。
    • 使用之后立即將所有試劑放回28。
    • ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
    • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
    • 操作步驟:
    • 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
    • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8。
    • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
    • 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
    • 加標準品/樣本50µl /孔,然后加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,37℃環(huán)境中反應30min
    • 倒出孔中液體,將酶標板倒置在吸水紙上拍打,去除孔中液體。加入250µl/孔洗滌液,15-30s后倒出孔中液體,用吸水紙拍干,如此重復操作共洗板5次。
    • 酶標記物:加入酶標記物100µl/孔,用蓋板膜封板,37℃環(huán)境中反應30min。取出酶標板,如前述洗板5次。
    • 顯色:每孔加入底物A50µl,再加底物B50µl,輕輕振蕩混勻,37環(huán)境中避光顯色15min。
    • 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

    七、結果判定

    結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含鏈霉素量成負相關。

    1、粗略判定:

    用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb2.243; 0.1ppb1.8160.4ppb1.415;1.6ppb0.74;6.4ppb0.313;25.6ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是6.4ppb25.6ppb;樣本2的濃度范圍是0.4ppb1.6ppb,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實際濃度。

    2、定量分析

    1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第—個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

    百分吸光%)=

    B

    ×100%

    B0

    B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

    B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

    2)標準曲線的繪制與計算

    以標準品百分吸光率為縱坐標,以鏈霉素標準品濃ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。

    八、 注意事項

    • 室溫低于25或試劑及標本未回到室溫(2025)會導致所有標準的OD值偏低。
    • 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
    • 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
    • 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
    • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
    • 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
    • 顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質。
    • 該試劑盒jia反應溫度為37,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

    九、儲藏條件和保質期

    • 儲藏條件:試劑盒于28保存,不要冷凍。
    •   期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

    提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結果,請放心使用。

     

     

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