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    炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR 法)
    點擊次數(shù):1709 更新時間:2020-07-02

    炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR )

    【產(chǎn)品名稱】

    將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應的反

    應管中,蓋好管蓋,勻,短暫離心。

    通用名稱:炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR )

    Name

    Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method)

    4  擴增(核酸擴增區(qū))

    4.1 將待檢測反應管于熒光定量  PCR  儀反應槽內(nèi);

    4.2 設(shè)好通道、樣品信息,反應體系設(shè)25μL;

    熒光通道選擇:  檢測通道(Reporter DyeFAM, 淬滅通道(Quencher Dye

    NONEABI 系列儀器請勿選擇 ROX 比熒光,選擇 None  即可。

    【包裝規(guī)格】48T/

    【預期用途】

    炭疽是由炭疽桿菌(Bacillus Anthracis, BA)感染引起的一種人獸共患病。BA

    在環(huán)境中形成芽孢,可長期、穩(wěn)定地存在于自然界中。由于 BA  的穩(wěn)定性及其致

    病性,易引發(fā)突發(fā)公共衛(wèi)生事件。目前的 BA  檢測方法主要基于病原體的培養(yǎng)、染色

    鏡檢、血清學檢測等,但這些方法均適合早期的快速偵檢?;诤怂釞z測的熒光-PCR

    技術(shù),因其靈敏度高、操作簡單、特異性好,可快速檢測炭疽病原,及時控制炭疽疫

    4.3  推薦循環(huán)數(shù)設(shè)

    步驟

    循環(huán)數(shù)

    溫度

    95

    94℃

    55

    時間

    收集熒光信號

    1

    1 cycle

    10min

    15sec

    30sec

    [1]

    。

    2

    40 cycles

    本試劑盒適用于檢測皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌,用于

    炭疽桿菌感染的輔助診斷。

    5  結(jié)果分析判定

    6.1結(jié)果分析條件設(shè)定

    【檢驗原

    [2-3]

    ,用熒光 PCR  技術(shù)對炭疽

    設(shè) Baseline Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當曲線出現(xiàn)

    整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline start (一般可在 3~15  范圍內(nèi)調(diào)

    節(jié))stop (一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold Value (上下拖動

    閾值線至高于陰性對照),新分析結(jié)果。

    本試劑對炭疽桿菌特異性基因設(shè)計引物和熒光探針

    桿菌的核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

    【試劑組成】

    7結(jié)果判斷

    核酸提取液

    酶液

    1.5mL×2  管

    50μL×1 管

    1.0mL×1 管

    50μL×1 管

    250μL×1 管

    陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,丏曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

    可疑:檢測通道 Ct >35.0,丏出現(xiàn)明顯擴增曲線的樣本建議復試驗,復試

    驗結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0  和明顯擴增曲線者為陽性,否則為陰性。

    陰性:樣本檢測結(jié)果無 Ct  值丏無明顯的擴增曲線。

    BA  反應液

    BA  陽性質(zhì)控品

    陰性質(zhì)控品

    8 檢測方法的局限性

    注:

    1同批號試劑用。

    Ø  樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);

    Ø  樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

    Ø  陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導致假陽性結(jié)果;

    Ø  病原體在流行過程中基因突變、組,會導致假陰性結(jié)果;

    Ø  同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結(jié)果;

    Ø  試劑運輸,保存當或試劑配制準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定

    量檢測準確的結(jié)果;

    2)試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標示的檢測次數(shù)。

    【儲存條件及有效期】

    -20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融數(shù)超過 5 次,有效期 12  個月。

    【適用儀器】

    ABI  、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Radeppendorf  等系列

    熒光定量 PCR  檢測儀。

    Ø  本檢測結(jié)果僅供考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

    9.  質(zhì)控標準

    【標本采集】

    陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線或無 Ct  值顯示;

    陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,丏 Ct  值≤32;

    以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

    皮膚炭疽,取水泡液 1mL;肺炭疽,采集咽拭子標本,放入標本采集管中;腸炭

    疽,取糞便  1g

    【保存和運輸】

    上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可-70℃,但能超過 6  個月,標本

    運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

    【注意事項】

    Ø  所有操作嚴格按照說明書進行;

    Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化,*并短暫離心;

    Ø  反應液應避光保存;

    【使用方法】

    1.  樣品處(樣本處區(qū))

    Ø 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

    Ø  使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服;

    Ø 樣本處、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;

    Ø 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處工作臺和移液器;

    Ø  試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通

    則》進行處。

    實驗代做服務:

     

    免疫組化IHC染色實驗服務

    細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

    試劑盒免費代檢測

    實驗室代做實驗項目

     

    透射電鏡服務實驗服務

    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

    核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務

    免疫共沉淀(CHIRP)實驗

    RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

    酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務

    雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

    喹諾酮類快速檢測試劑盒

    組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務

     

    染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

     

    多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實驗

    免疫細胞化學ICC實驗服務

    ATP/ADP檢測實驗服務

    蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

    蛋白相互作用分析

    堿性磷酸酶染色實驗服務

    PKC活性檢測實驗

    非標定量實驗

    (Label-free)

     

    DIGE技術(shù)實驗服務

    端粒酶活性檢測實驗

    細胞生長曲線的測定

    掃描電鏡服務

    NF-KB p65活性檢測實驗

     

    也】

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