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    Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書
    點(diǎn)擊次數(shù):1636 更新時(shí)間:2020-06-19

    Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書

     

    Super-BradfordProteinAssayKit                                                       

    Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書

     

    

    Cat.No. K0013                         

     

    保存:2-8℃

     

    組分說明

    

     

    Catalogno.                                 K0013

    KitSize                                800 次/微孔,100 次/試管

    BradfordProteinAssayReagent               200ml

    BSA 標(biāo)準(zhǔn)液(2mg/ml)                          2ml

     

    

     

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介

     

        Bradford 法是簡(jiǎn)dan和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍(lán) G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合后,產(chǎn)生藍(lán)色化合物,反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在 465-595nm 處有大的光吸收值,化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系,因此可通過檢測(cè) 595nm 的光吸收值的大小來計(jì)算蛋白的含量。本產(chǎn)品將傳統(tǒng)的 Bradford 方法進(jìn)行了改良,大限度的加大蛋白定量的線性范圍,變異性小于普通考馬斯亮藍(lán)染色法,靈敏度范圍為 100-1,500 μg/ml。使用本產(chǎn)品反應(yīng)迅速,顏色產(chǎn)物 1 小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。本試劑盒適用于多種緩沖液系統(tǒng),不受金屬離子、還原劑和螯合劑的干擾。

     

    注意事項(xiàng) 

     

     1.  如待測(cè)樣品中含較多的干擾物質(zhì)(具體見附表 1),可采用 BCA 蛋白定量試劑盒(K0014)或其他蛋白定量產(chǎn)品。

     

     2.  BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測(cè)樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進(jìn)行稀釋)。

     

     3.  本試劑盒不適合含有去污劑的蛋白定量,所測(cè)蛋白分子量必須大于 3kD。

     

     4.  操作中請(qǐng)佩戴手套。

     

     5.  本產(chǎn)品僅限科研使用。

     

    

    操作步驟(以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)為例)

     

     1.  稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品:用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。

     

     

                                                    

    管號(hào)    稀釋液用量(μl)   BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量(μl)    BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度(μg/ml)

                                                     

     

    A                 0                 100                2,000

    B                50                 150                1,500

     

    C                200                200                1,000

     

    D                200         200(從C管中?。?         500

    E                200         200(從D管中取)          250

     

    F                200         200(從E管中?。?          125

    G                200                 0                 0(空白)

     

     

     2.  試管檢測(cè)(檢測(cè)范圍:100-1500 μg/ml)

     

        1)按上表稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,將 30 μl 稀釋好的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品分別加到作好標(biāo)記的試管中。 

        2)取干凈的試管,分別加入 30 μl 待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液),并作好標(biāo)記,推薦每個(gè)測(cè)定做 2-3 個(gè)平行反應(yīng)。

     

        3)向步驟 1)和步驟 2)的試管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,室溫放置 10 分鐘。

     

        4)用分光光度計(jì)測(cè)定 595nm 處的吸光值。

     

        5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

     

            注意:數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯(cuò)誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線,可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。

     

        6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi),請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。

     

     3.  微孔檢測(cè)(檢測(cè)范圍:100-1500 μg/ml)

     

        1)將按表 1 稀釋好的 A-GBSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液)各 5 μl 分別加到作好標(biāo)記的 96 孔板微孔中。 

     

        2)每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,蓋上 96 孔板蓋,室溫放置 10 分鐘。

     

        4)用酶標(biāo)儀測(cè)定 595nm 處的吸光值。

     

        5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

     

            注意:數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯(cuò)誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線,可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。

     

        6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi),請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。

     

      

     附表

                                                   附表 1. 干擾物質(zhì)表

                                                             

    化合物             耐受濃度              化合物             耐受濃度

     

             緩沖液                            去垢劑和變性劑

     

    乙酸鹽               0.6M            Brij35            干擾

    甘氨酸               0.1M          脫氧膽酸納              0.25%

     

    HEPES             0.1M            CHAPS              1%

     

    MES              0.7M            NP-40             干擾

     

    MOPS              0.2M            辛葡糖                2%

     

    Na + -檸檬酸               50mM              SDS              0.1%

          

    PIPES          500mM           Tween-20            干擾

     

    磷酸鈉/磷酸鈉                1M          TritonX-100         0.1%

     

    乙酸鈉               0.6M                      糖類

     

    Tris             2M              蔗糖               1mM

     

    鹽類                                螯合劑

     

    硫酸銨                1M              EDTA           100mM

    NaCl              1M              EGTA            50mM

     

    尿素                6M                         

     

    極性化合物                                 其他

     

    甘油               99%               HCl             0.1M

     

    還原劑                       NaOH              0.1M

     

    β-巰基乙醇               1M              NAD              1mM

    DTT               1M               苯                5%

    

    

    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

     

    免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

     

     

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