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    HiFi-MMLV cDNA第- 鏈合成試劑盒
    點擊次數(shù):2077 更新時間:2020-02-01

       HiFi-MMLV cDNAdi一鏈合成試劑盒

     

     

     

     

    HiFi-MMLV cDNA Kit

    目錄號:K0744

    保存條件:-20℃保存。

    組分說明

    組分說明

     

     Cat. No.           K0744      K0744A

     Kit Size           25          100

    HiFi-MMLV,200 U/μl    25 μl        100 μl

    5×RT Buffer         120 μl       500 μl

    Primer Mix          60 μl        240 μl

    dNTP Mix,2.5 mM Each   120 μl       500 μl

    DTT,0.1 M          60 μl        240 μl

    RNase-Free Water      1 ml         1 ml

     

     

                 本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

     

     

    產(chǎn)品簡介

     

      本產(chǎn)品是專為兩步法RT-PCRdi一步實驗配制的cDNAdi一鏈合成試劑盒。本產(chǎn)品包

    含從RNA模板逆轉(zhuǎn)錄成cDNAdi一鏈所需的所有試劑,其中包括HiFi-MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶、

    反應(yīng)緩沖液、引物、dNTP等。經(jīng)過突變改造的HiFi-MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶RNase H活性缺失,

    減少了逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中RNA的降解,更容易獲得全長的cDNA。HiFi-MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶熱穩(wěn)

    定性強,可得高產(chǎn)量的 cDNA,使用簡單方便。本系統(tǒng)對后續(xù)的  PCR以及定量PCR試

    驗兼容性高,適用各種PCR反應(yīng)的DNA聚合酶。

     

    產(chǎn)品特點

     

    ·RNase H-:經(jīng)突變的HiFi-MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶,RNase H活性缺失,更易獲得全長cDNA。

    ·使用方便:試劑盒包含除RNA模板外的逆轉(zhuǎn)錄所需全部試劑。

     

    注意事項

     

    1.在操作過程中應(yīng)避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒炛械慕徊嫖廴?,建議在專門

       的區(qū)域進行RNA操作,使用專門的儀器和耗材,操作人員帶口罩和一次性手套并經(jīng)

       常更換手套。

    2.實驗盡量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,應(yīng)使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙

       酯)水溶液在37℃處理12小時,并在120℃下高壓滅菌30分鐘后使用,或者將玻璃

       器皿在180℃下干熱滅菌60分鐘后使用。實驗中用到的無菌水應(yīng)使用 0.1%的DEPC

       處理后進行高壓滅菌。

    3.本試劑盒中的所有試劑使用前請上下顛倒輕輕混勻,盡量避免起泡,并經(jīng)短暫離心

       后使用。所涉及的酶類使用后應(yīng)盡快放回-20℃,避免反復凍融。

    4.若起始RNA的量小于50  ng,建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提

       供,如需要可單獨向本公司訂購,貨號:YJ0596。

     

     

    使用方法

     

    注意:10 ng-5 μg總RNA可建立20 μl反應(yīng)體系,如果總RNA量大于5 μg,請按比例擴大反應(yīng)體系。

     i逆轉(zhuǎn)錄操作步驟:

    1.將RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、HiFi-MMLV和RNase-Free Water

       溶解并置于冰上備用。

    2.根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系,總體積為20 μl。

     

    試劑                   20 μl反應(yīng)體系      終濃度

    dNTP Mix,2.5 mM Each       4μl         500 μM Each

    Primer Mix              2μl

    RNA Template             Xμl           1 ng-5 µg

    5×RT Buffer             4μl              1×

    DTT,0.1 M             2μl            10 mM

    HiFi-MMLV,200 U/μl                 1  μl

    RNase-Free Water               up to 20  μl

     

    注意:1)若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供,如需要可單獨向本公司訂購,貨號:K0596。

        2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。

    3.渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

    4.42℃孵育30-50分鐘,85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

    5.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng),或置于-20℃長期保存。

    ii  若逆轉(zhuǎn)錄效率低,或RNA模板二級結(jié)構(gòu)復雜、GC含量高時,建議采用以下步驟:

    1.將RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、HiFi-MMLV和RNase-Free Water

       溶解并置于冰上備用。

    2.根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系,總體積為13 μl。

     

    試劑                    20 μl反應(yīng)體系     終濃度

    dNTP Mix,2.5 mM Each        4 μl         500 μM Each

    Primer Mix                2 μl

    RNA Template              X μl           1 ng-5 µg

    RNase-Free Water               up to 13  μl

     

    3.70℃孵育10分鐘,迅速冰浴2分鐘。

    4.短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

    5.繼續(xù)向以上反應(yīng)液中加入以下試劑:

     

    試劑               20 μl反應(yīng)體系          終濃度

    5×RT Buffer           4 μl               

    DTT,0.1 M             2 μl             10 mM

     

            

     注意:1)若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供,如需要可單獨向本公司訂購,貨號:YJ0596。

            2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。

    6.輕輕吹打混勻,42℃孵育2分鐘。

    7.加入1 μl HiFi-MMLV(200 U/μl),輕輕吸打混勻。42℃孵育50分鐘。

    8.85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

    9.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng),或置于-20℃長期保存。

     

         相關(guān)產(chǎn)品信息

     

    目錄號               產(chǎn)品名稱                              產(chǎn)品特點

    K0580   TRIzon總RNA提取試劑                適用范圍廣的RNA提取試劑

    K0581 超純RNA提取試劑盒   兼具有適用范圍廣和純度高特點的RNA提取試劑

    K0597 超純RNA提取試劑盒(含DnaseI)靈敏度高,可識別pg級別的模板。與RNA親和力強,

    K0741   SuperRT cDNA第yi鏈合成試劑盒    能夠通讀GC含量高,二級結(jié)構(gòu)復雜的RNA模板。

    K0744   HiFi-MMLV cDNA第yi鏈合成試劑盒高效獲得cDNA產(chǎn)物

    SuperQuickRT  cDNA第yi鏈合成試逆轉(zhuǎn)錄(針對于熒光定量PCR)

    K2381 劑盒(For Real-time PCR)僅需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA

    SuperQuickRT MasterMix         即用型逆轉(zhuǎn)錄mix,只需加入RNA和水即可反應(yīng)。僅

    K2391     (for Real-Time PCR)     需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA

    K0688   Es Taq DNA Polymerase 兼具高擴增效率和高保真性的PCR產(chǎn)品

    K0690   Es Taq MasterMix

    K0957   UltraSYBR Mixture              熒光定量PCR—SYBR Green法

    K0956   UltraSYBR Mixture(With ROX)    特異性強、Ct值低、定量更準確

     

     

     實驗室代做實驗項目

     

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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