性欧美熟妇,综合另类人妻,人妻系列免费无码专区,久久精品蜜芽,亚洲色婷婷在线

  1. 當(dāng)前位置:
    首頁 > 技術(shù)文章 > SuperRT一步法RT-PCR試劑盒說明書
    目錄導(dǎo)航 Directory
    服務(wù)熱線
    技術(shù)支持Article
    SuperRT一步法RT-PCR試劑盒說明書
    點(diǎn)擊次數(shù):2094 更新時(shí)間:2020-02-01

    SuperRT一步法RT-PCR試劑盒說明書

     

     

    SuperRT One Step RT-PCR Kit

    目錄號:K0742

    保存條件:-20℃保存。

    組分說明

     

               Cat. No.                       K0742

               Kit Size                        100

               SuperRT OneStep RT-PCR EnzymeMix       50 μl

               2×OneStep RT-PCR Buffer             1.4 ml

               RNase-Free Water                   1 ml

     

     

                 本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

     

     

    產(chǎn)品簡介

     

      本試劑盒是專為一步法RT-PCR實(shí)驗(yàn)研制,逆轉(zhuǎn)錄和PCR在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行,

    反應(yīng)過程中無需添加試劑,無需打開管蓋,在避免污染的同時(shí)提高了檢測靈敏度和實(shí)驗(yàn)

    效率。本試劑盒包括全新高效逆轉(zhuǎn)錄酶、快速熱啟動(dòng)DNA聚合酶,同時(shí)包含適用于逆轉(zhuǎn)

    錄和PCR擴(kuò)增的反應(yīng)緩沖液和實(shí)驗(yàn)中所必需的其它組分。SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶RNase H活

    性缺失,減少了逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中 RNA的降解。該逆轉(zhuǎn)酶逆轉(zhuǎn)錄效率高,可對少量 RNA模

    板進(jìn)行良好的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。 PCR反應(yīng)使用的快速熱啟動(dòng) DNA聚合酶具有擴(kuò)增效率高、

    特異性強(qiáng)、延伸速度快的優(yōu)良性能。*的緩沖體系使逆轉(zhuǎn)錄酶和聚合酶同時(shí)發(fā)揮大

    功效。使用本試劑盒擴(kuò)增得到的目的產(chǎn)物3′端附有一個(gè)″A″堿基,可直接用于T/A克隆。

     

    注意事項(xiàng)

     

    1.在操作過程中應(yīng)避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒?yàn)中的交叉污染,建議在專門

       的區(qū)域進(jìn)行RNA操作,使用專門的儀器和耗材,操作人員帶口罩和一次性手套并經(jīng)

       常更換手套。

    2.實(shí)驗(yàn)盡量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,應(yīng)使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙

       酯)水溶液在37℃處理12小時(shí),并在120℃下高壓滅菌30分鐘后使用,或者將玻璃

       器皿在180℃下干熱滅菌60分鐘后使用。實(shí)驗(yàn)中用到的無菌水應(yīng)使用 0.1%的DEPC

       處理后進(jìn)行高壓滅菌。

    3.本試劑盒中的所有試劑使用前請上下顛倒輕輕混勻,盡量避免起泡,并經(jīng)短暫離心

       后使用。所涉及的酶類使用后應(yīng)盡快放回-20℃,避免反復(fù)凍融。

    4.本試劑盒必須使用特異性引物,引物的選擇可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來選擇,引物設(shè)計(jì)的好

       壞直接影響到RT-PCR  反應(yīng)的結(jié)果,設(shè)計(jì)引物時(shí)需考慮GC含量,引物長度,引物

       位置,PCR產(chǎn)物的二級結(jié)構(gòu)等因素,建議采用專業(yè)的引物設(shè)計(jì)軟件來設(shè)計(jì)。

     

     

    使用方法

     

    1.將RNA模板、引物、  OneStep  RT-PCR   Buffer、SuperRT    OneStep   RT-PCR

       EnzymeMix和RNase-Free   Water溶解并置于冰上備用。

    2.根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系:

    試劑                             25 μl反應(yīng)體系    終濃度

          2×One Step RT-PCR Buffer          12.5 μl     1×

          Forward Primer,10 µM            1 μl       0.4 μM

          Reverse Primer,10 µM            1 μl       0.4 μM

          SuperRT OneStep RT-PCR EnzymeMix     0.5 μl

          RNA Template X μl              1 pg – 1 µg

          RNase-Free water               up to 25 μl

     

       注意:引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下,可提高引物的濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

     

    3.渦旋震蕩混勻,短暫離心,將溶液收集到管底。

    4.將熱循環(huán)儀預(yù)熱到45℃,將PCR管置于熱循環(huán)儀中,進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。

       反應(yīng)條件:

     

      步驟            溫度        時(shí)間

     反轉(zhuǎn)錄           45℃         30 min

     PCR預(yù)變性         95℃       2 min

     變性          94℃         30 s

     退火             55-65℃      30 s      30-40個(gè)循環(huán)

     延伸           72℃       30 s

     終延伸          72℃       5 min

     

       注意:1)一般PCR實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm低5℃,退火時(shí)間一般為20-30秒,無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí),適當(dāng)降低退火溫度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),提高退火溫度,由此優(yōu)化反應(yīng)條件。

       2)延伸時(shí)間根據(jù)擴(kuò)增的片段大小設(shè)定,本產(chǎn)品中包含的DNA Polymerase擴(kuò)增效率為1 kb/30s。

       3)可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;循環(huán)次數(shù)多,錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加,非特異性背景嚴(yán)重。所以,在保證產(chǎn)物得率的前提下,應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。

     

    5.反應(yīng)結(jié)束后取5 µl反應(yīng)產(chǎn)物,加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行電泳檢測結(jié)果。

     

         相關(guān)產(chǎn)品信息

     

    目錄號      產(chǎn)品名稱            產(chǎn)品特點(diǎn)

    K0580      TRIzon總RNA提取試劑      適用范圍廣的RNA提取試劑

    K0581      超純RNA提取試劑盒                  兼具有適用范圍廣和純度高特點(diǎn)的RNA提取試劑

    K0597    超純RNA提取試劑盒(含DnaseI)靈敏度高,可識(shí)別pg級別的模板。與RNA 親和力強(qiáng),

    K0741      SuperRT cDNA第--鏈合成試劑盒        能夠通讀GC含量高,二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板。

    K0744   HiFi-MMLV cDNA第--鏈合成試劑盒高效獲得cDNA產(chǎn)物

    SuperQuickRT  cDNA第--鏈合成試逆轉(zhuǎn)錄(針對于熒光定量PCR)

    K2381 劑盒(For Real-time PCR)      僅需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA

    SuperQuickRT MasterMix     即用型逆轉(zhuǎn)錄mix,只需加入RNA和水即可反應(yīng)。僅

     

    K2391   (for Real-Time PCR) 需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA

    K0688   Es Taq DNA Polymerase   兼具高擴(kuò)增效率和高保真性的PCR產(chǎn)品

    K0690   Es Taq MasterMix

    K0957   UltraSYBR Mixture       熒光定量PCR—SYBR Green法

    K0956   UltraSYBR Mixture(With ROX)  特異性強(qiáng)、Ct值低、定量更準(zhǔn)確

     

     

    實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

     

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

    男人天堂av综合网| 天天操熟女| 麻豆天美一区| 国产乱人伦无码视频| 一本一道久久a久久综合精品| 国产AV无码专区亚洲A∨毛片 | 超碰人人爱人人操| 人妻一区二区三区欧美巨觅在线 | 嫩模一区二区三区| 少妇无码AV无码专区在线观看| 亚洲草视频| 欧美成人AAA片一区国产精品| 日韩精品人妻无码中文字幕精品 | 久久人妻影院| 久久九九视频| 操女人免费网站| 国产成人第一页| 97中文字幕| 99久久99久久精品国产片果冰| 乌兰浩特市| 色欲av伊人久久大香线蕉影院| 一级二级av| 鹰潭市| 色婷婷精品久久二区二区蜜桃| 亚洲精品亚洲人成在线| 东海县| 大香蕉在线看| 欧美一区二区三区免费观看| 亚洲精品人妻视频| 巫溪县| 国产欧美一区二区在线观看| 91在线老司机| 夜夜爽妓女8888免费下载| 无码一二三| 天堂俺去俺来也www久久婷婷| 婷婷伊人在线| 久久国产传媒| 天天搞夜夜干| 日日综合| 中文字幕欧美人妻精品一区蜜臀| 日韩精品三|