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    布魯氏菌病抗體檢測試劑盒使用說明書
    點(diǎn)擊次數(shù):3641 更新時(shí)間:2019-11-25

    布魯氏菌病抗體檢測試劑盒

    使用說明書

    【介紹】

    布魯氏菌病(brucellosis,Bru,布病)抗體檢測試劑盒用于檢測牛、羊、豬、犬等動(dòng)物血清中的布魯氏菌抗體。

    本試劑盒采用競爭ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被布魯氏菌抗原。在試驗(yàn)中,加入稀釋液、待檢血清與酶結(jié)合物,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有布魯氏菌特異性抗體,則與酶結(jié)合物中的酶標(biāo)記抗體競爭板孔中包被的抗原表位,溫育后將多余的游離抗體通過洗滌去除;在微孔中加入TMB顯色液,經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號與樣本中的抗體含量成反比,加入終止液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。

    組份

    1

    抗原預(yù)包被板條

    1/2塊

    7

    終止液

    6/11ml

    2

    酶結(jié)合物

    10/20ml

    8

    陰性對照

    200ul

    3

    10倍濃縮洗滌液

    100ml

    9

    陽性對照

    60ul

    4

    顯色液

    11/22ml

    10

    封板膜

    2/4張

    5

    樣本稀釋液

    100ml

    11

    說明書

    1份

    6

    稀釋板

    1/2塊

     

     

     

     

    需自備的設(shè)備及試劑

    • 微量移液器:10µl-100µl、100µl-1000µl。
    • 一次性移液器吸頭。
    • 量筒:500ml。
    • 96孔板酶標(biāo)儀。
    • 蒸餾水或去離子水。
    • 洗瓶或洗板機(jī)。

     

    【樣品制備】

    取動(dòng)物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

    【洗滌液的準(zhǔn)備】

    濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

    【注意事項(xiàng)】

    • 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時(shí)以上。使用前應(yīng)搖勻,使用后放回2-8℃。
    • 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
    • 顯色液和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。
    • TMB(顯色液)不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
    • 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。
    • 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
    • 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得zui好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須。
    • 抗原包被板為一次性用品,不得重復(fù)使用; 

    【操作步驟】

    • 在稀釋板上按1:40稀釋待檢血清樣本以及陰陽性對照品(195µl樣本稀釋液+5µl樣本血清),并吹打均勻
    • 取預(yù)包被的檢測板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取20µl加入到檢測板孔內(nèi)。同時(shí)設(shè)陰性對照2孔,陽性對照1孔,取陰性及陽性稀釋液各20µl分別加入反應(yīng)孔中。
    • 然后再加酶結(jié)合物80µl/孔,加入反應(yīng)孔中輕微震蕩混勻(勿溢出),蓋上封板膜,置37℃溫育60分鐘。
    • 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復(fù)4-6次,zui后在干凈吸水紙上拍干。
    • 每孔加顯色液100µl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
    • 每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

    【結(jié)果判定】

    用酶標(biāo)儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。

    試驗(yàn)成立的條件是

     陰性對照(N)OD值>0.5,同時(shí)陽性對照(P)阻斷率>80%;

    計(jì)算方法:

    PI (阻斷率)= {1 —(樣品OD值 ÷ 陰性O(shè)D均值)}×100%

    陰陽性判斷:

    PI(阻斷率)>70%則判斷為陽性;

    PI70%則判斷為陰性。

    【有限期】

    貯存方法: 2 - 8ºC下貯存。

    有效期: 12個(gè)月。

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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