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    MCF-12F 人乳腺上皮細胞
    點擊次數:1533 更新時間:2019-11-21

    MCF-12F 人乳腺上皮細胞

    Catalogue No.: C1287

    Product Format: a T25 flask

    Culture Properties貼壁

    Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%雙抗

    Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

    Application:  Cells and cancer research

    NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

     

    Components  

    Item

    Specifications

    a T25 flask

    2X106

    Manual

    1 copy

     

    Operation steps for cell culture

    • 吸走多余培養(yǎng)基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞;
    • 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表面,培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化;
      (細胞對于消化比較敏感,消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài),導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時即可終止,禁止消化到細胞*漂浮?;靹蚣毎麜r盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
    • 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細胞混勻;
    • 將混勻的細胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng);

    傳代比例: 不同細胞生長速度不一,具體傳代比例視細胞生長速度而定,大部分細胞適用1:3-1:4傳代,生長較慢的細胞可以1:2傳代。

    Cell cryopreservation

    1.凍存液:92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據實驗室條件自行選擇)

    2.降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過夜后液氮保存。

    Tips:

    • 細胞經過運輸后,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F象。貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。加5ml PBS重懸細胞,再900-1000rpm(約150g)離心3min,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗次。
    • 細胞生長不均時,可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
    • 細胞生長緩慢時,可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)(不超過20%),也可以根據細胞生長狀態(tài),選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

    不同細胞貼壁性差異比較大,所以消化時間差別較大,20s-10min均有可能,具體以細胞消化到相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準,嚴禁消化到細胞*漂浮。

    滬公網安備 31011802001676號

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