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    β-興奮類快速檢測試劑盒說明書
    點擊次數(shù):2632 更新時間:2019-03-22

    EF33B\J2                  

     

      β-興奮快速檢測試劑盒說明書

    一、原理

    本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的β-興奮類藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗β-興奮類藥抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含β-興奮類藥物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)β-興奮類藥物的含量。

    二、試劑盒特性

    1. 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
    2. 孵育溫度:       25℃
    3. 孵育時間:       30min~15min
    4. 樣本檢測下限

    豬   尿 ··········································  0.3ppb

    豬   肉 ··········································  0.6ppb

    1. 交叉反應(yīng)率

    克倫特羅(Clenbuterol)·························  100%

    西馬特羅(Cimaterol)   ·······················  <4%  

    溴布特羅(Brombuterol)   ······················  60%

    馬布特羅(Mabuterol)  ·························  108%

    班布特羅(Bambuterol)  ······················   <5%

    氯丙那林(Clorprenaline)  ·····················  <1%

    沙丁胺醇(Salbutamol)  ·························  75%

    特布他林(Terbutaline )  ······················  25%

    噴布特羅(Penbutolol)  ·························  19%

    妥布特羅(Tulobuterol)  ························  23%

    菲諾特羅(Fenoterol)  ····························<0.1%

    萊克多巴胺(Ractopamine) ······················ <0.1%

    1. 樣本回收率

    豬 尿、豬 肉  ····························  90%±30%

    三、試劑盒組成

    1

    微量測試孔

    每條8孔,一板12條

    2

    標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

    (1ml/瓶)

    0ppb

    0.1ppb

    0.3ppb

    0.9ppb

    2.7ppb

    8.1ppb

    3

    酶標(biāo)記物

    7ml

    紅色帽

    4

    抗體工作液

    10ml

    藍(lán)色帽

    5

    底物A液

    7ml

    白色帽

    6

    底物B液

    7ml

    黑色帽

    7

    終止液

    7ml

    黃色帽

    8

    20X濃縮洗滌液

    40ml

    白色帽

    9

    5X樣本提取液

    50ml

    透明帽

    四、所用儀器、試劑

    具備的儀器:酶標(biāo)儀、離心機、恒溫箱、打印機

    微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl

    試      劑:氫氧化鈉、濃鹽酸

    五、樣本前處理步驟

    1. 樣本處理前須知

    (a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

       (b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

    1. 樣本前處理需配制:

    配液1   0.2M 鹽酸

    取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L。

    配液2   1M 氫氧化鈉

        稱取4g 氫氧化鈉固體加去離子水定溶至    

        100ml。

    配液3   樣本提取液

        5X樣本提取液用去離子水1:4稀釋。

    1. 樣本處理:

    (a)豬肉樣本的處理方法

    1. 稱取 2 ± 0.05g 均質(zhì)后的組織于50ml離心管中,加入3ml 0.2M鹽酸(見配液1),充分振蕩3min。
    2. 再加入600ul 1M 氫氧化鈉(見配液2)溶液和2.4ml 樣本提取液(見配液3)溶液,充分振蕩3min,室溫4000r/min 以上離心10min。
    3. 取20 µl上層液體用于分析。(注:離心后若有脂肪層,去除脂肪層或撥開脂肪層,取清澈液體進(jìn)行分析)。

    樣本稀釋倍數(shù):  4倍

    (b)豬尿樣本的處理方法

    取20µl清亮尿樣直接測定(如果尿樣渾濁一定

    要過濾或4000r/min離心10min,直至得到清亮

    尿樣),暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

    樣本稀釋倍數(shù):  1倍

    六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

    1. 測定前應(yīng)須知:
    1. 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。
    2. 使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。
    3. 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
    4. 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
    1. 操作步驟:
    1. 從2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
    2. 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
    3. 配液:將 40ml濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去離子水按照 1:19 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
    4. 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
    5. 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本20µl/孔到各自的微孔中,加入酶標(biāo)記物50µl/孔,然后加入80µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境反應(yīng)30min。
    6. 將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液250µl/孔洗板4~5次,每次間隔15~30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
    7. 顯色:加入底物A液50µl/孔,再加入底物B液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色15min。
    8. 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

    七、結(jié)果判定

    結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含β-興奮量成負(fù)相關(guān)。

    1、粗略判定:

    用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.1ppb為1.816;0.3ppb為1.415;0.9ppb為0.74;2.7ppb為0.313;8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb~8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb~0.9ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中β-興奮類藥物實際濃度。

    2、定量分析

    (1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

    百分吸光率(%)=

    B

    ×100%

    B0

    B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

    B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

    (2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

    以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以β-興奮標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中β-興奮類藥物實際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。( 索?。?/span>

    八、 注意事項

    1. 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
    2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
    3. 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
    4. 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
    5. 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
    6. 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
    7. 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。
    8. 該試劑盒理想反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

    九、儲藏條件和保質(zhì)期

    1. 儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。
    2. 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

    提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

     

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