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    雞β干擾素(IFN-β)試劑盒使用說明書
    點擊次數(shù):1726 更新時間:2016-10-10

    雞β干擾素(IFN-β)ELISA酶聯(lián)免疫分析

     

    試劑盒使用說明書

    本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定雞血清,血漿及相關(guān)

    液體樣本中β干擾素(IFN-β)的含量。

    實驗原理:

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中雞 β干擾素(IFN-β)水平。用純化的雞 β干擾素 (IFN-β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入 β干擾素,再與 HRP標記的 IFN-β抗體結(jié)合,形成抗體 -抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 β干擾素(IFN-β)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度( OD值),通過標準曲線計算樣品中雞 β干擾素(IFN-β)濃度。

    試劑盒組成:

     

     

    樣本處理及要求:

     

     

    1.  血清:室溫血液自然凝固 10-20分鐘,離心 20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔

    2. 細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

     

     

    2. 

    血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20分鐘后,離心 20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

     

     

     

     

    3. 尿液:用無菌管收集,離心 20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

     

     

    4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/

    分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用 PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

     

    5.  組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?2-8℃的溫度。加入一定量的 PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用

    6. 

    7. 。

    8.  

     

     

     

    6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于 -20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融 .

     

    7. 不能檢測含 NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。

     

    操作步驟:

     

    1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10孔,在*、第二孔中分別加標準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取 100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl棄掉,再各取 50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃度分別為 48ng/L,32ng/L,16ng/L,8ng/L4ng/L)。

     

    2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

     

    3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。

     

    4. 配液:將 3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 3048T20倍)倍稀釋后備用。

     

    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。

     

    6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

     

    7. 溫育:操作同 3。

     

    8. 洗滌:操作同 5

     

    9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.

     

    10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

     

    11. 測定:以空白空調(diào)零, 450nm波長依序測量各孔的吸光度( OD值)。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。

     

    注意事項:

     

    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

    4.請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)( n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準 .

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

    計算:

    以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

     

    (此圖僅供參考)

    試劑盒性能:

    1. 樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R值為 0.95以上。

    2. 批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于 9%11%

     

    檢測范圍:

    3ng/L -60ng/L

    保存條件及有效期:

    2-8℃。

    6個月

    滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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